Phospho-PKC alpha-T410+PKC delta-T410 Kaninchen-mAk für WB, ELISA - P17252 / Q05655

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PKC alpha und PKC delta Funktion und Lokalisierung

• PRKCA (PKC alpha) ist eine calciumaktivierte, phospholipid- und DAG-abhängige Serin/Threonin-Proteinkinase der PKC-Familie, zu der auch PRKCD (PKC delta) gehört. Sie reguliert Zellproliferation, Apoptose, Differenzierung, Migration und Adhäsion und ist in verschiedenen Krebsarten hoch exprimiert, wo sie als Tumorpromotor wirkt.
• PRKCA phosphoryliert Schlüsselsubstrate wie RAF1, BCL2 und TNNT2 und moduliert so die MAPK/ERK-Signalkaskade und Apoptose. Beispielsweise fördert die Phosphorylierung von BCL2 das Zellüberleben in Leukämiezellen.
• PRKCA spielt eine entscheidende Rolle bei der Zellmotilität: Nach Verletzung wandert sie zu Lamellipodien und phosphoryliert CSPG4, was eine Umstrukturierung des Zytoskeletts und eine polarisierte Migration induziert.
• Die Kinase lokalisiert im Zytoplasma, an der Zellmembran, der mitochondrialen Membran und im Zellkern, wobei die stimuli-induzierte Translokation für ihre kontextspezifischen Funktionen entscheidend ist.
• Die Phosphorylierung der Aktivierungsschleife (T410 in PKC delta, äquivalent in PKC alpha) ist für die Kinaseaktivität essentiell. Dieser monoklonale Antikörper erkennt spezifisch an T410 phosphoryliertes PKC alpha und delta.
• Im kardiovaskulären System reguliert PRKCA die Myokardkontraktilität negativ und fördert Angiogenese und Kardiomyozytenhypertrophie, teilweise über MAPK1/3-Signalwege, was sie mit Herzinsuffizienz in Verbindung bringt.
• PRKCA phosphoryliert DOCK8, um CDC42 bei der T-Zell-Migration zu kontrollieren (PubMed:28028151), und phosphoryliert KLHL3 im renalen Ionentransport (PubMed:25313067). Sie aktiviert auch LRRK1, um den RAB-Proteintransport zu regulieren (PubMed:36040231). Verwandte Referenzen:
  • PMID:28028151
  • PMID:25313067
  • PMID:36040231

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen war ein synthetisches Phosphopeptid, das den Regionen um T410 von humanem PRKCZ entspricht, das Homologie mit den Aktivierungsschleifensequenzen von PKC alpha und delta aufweist. Anwender sollten überprüfen, dass der Antikörper die erwarteten Phosphoproteine in ihrem System erkennt.
• Empfohlene Anwendungen sind WB und ELISA. Für WB sind die vorhergesagten Molekulargewichte 76 kDa (PKC alpha) und 77 kDa (PKC delta). Verwenden Sie geeignete positive (z.B. PMA-stimulierte Zellen) und negative (Phosphatase-behandelte oder unstimulierte) Kontrollen.
• Um die Phospho-Spezifität zu bestätigen, ziehen Sie in Betracht, vor der WB-Analyse eine Phosphatase-Behandlung der Lysate durchzuführen.
• Für ELISA befolgen Sie Standardprotokolle für Phospho-Antikörper und optimieren Sie die Beschichtungs- und Detektionsbedingungen für eine hohe Sensitivität.
• Da es sich um einen Kaninchen-monoklonalen Antikörper handelt, bietet er hohe Reproduzierbarkeit und Chargenkonstanz und eignet sich für quantitative Studien.

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