Phospho-PKA RIIα (PRKAR2A)-S99 Kaninchen mAb für WB und ELISA - P13861

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PRKAR2A

• PRKAR2A codiert die regulatorische Untereinheit der cAMP-abhängigen Proteinkinase Typ II-alpha, eine Schlüsselkomponente des PKA-Holoenzyms, die zelluläre Antworten auf cAMP moduliert.
• Als regulatorische Untereinheit von PKA bindet sie cAMP, was zur Dissoziation und Aktivierung der katalytischen Untereinheiten führt. Diese phosphorylieren anschließend nachgeschaltete Zielmoleküle, die am Stoffwechsel, der Genexpression und der Zellproliferation beteiligt sind.
• Regulatorische Untereinheiten des Typs II vermitteln die Membranassoziation durch Bindung an A-Kinase-Ankerproteine (AKAPs), einschließlich MAP2-Kinase, und lokalisieren so die PKA-Aktivität in spezifischen subzellulären Kompartimenten.
• Das menschliche Genom enthält vier Typen regulatorischer Untereinheiten (I-alpha, I-beta, II-alpha und II-beta); PRKAR2A gehört zur Klasse II-alpha, und seine Expression variiert zwischen den Geweben – in einigen ist sie konstitutiv, in anderen induzierbar.
• PRKAR2A ist überwiegend im Zytoplasma lokalisiert und kann durch Interaktionen mit Ankerproteinen mit der Zellmembran assoziieren, was eine räumliche Kontrolle des cAMP-Signalwegs ermöglicht.
• Das Protein unterliegt posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung an mehreren Stellen (z. B. Ser99) und Acetylierung, die seine Aktivität, Stabilität oder Interaktion mit Bindepartnern regulieren.
• Durch alternatives Spleißen entstehen verschiedene Isoformen, und das Protein wird unter Schlüsselwörtern wie Phosphoprotein, Acetylierung und cAMP-Bindung klassifiziert, was seine dynamischen regulatorischen Funktionen widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid um Ser99; überprüfen Sie die Phosphospezifität durch Vergleich der Signale zwischen behandelten und unbehandelten Proben oder verwenden Sie eine Blockierungskontrolle mit nicht-phosphoryliertem Peptid.
• Für das Western Blotting ist eine Bande nahe 46 kDa zu erwarten; optimieren Sie die Blockierung und Antikörperverdünnung im entsprechenden Probenystem, da die endogene Expression variieren kann.
• Im ELISA können Sie mit diesem Antikörper phosphoryliertes PRKAR2A in Zell- oder Gewebelysaten nachweisen; fügen Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen hinzu, um die Assayspezifität zu bestätigen.
• Die Kreuzreaktivität ist für Mensch und Ratte bestätigt; bei Verwendung von Mausproben validieren Sie die Kreuzreaktivität experimentell, da Sequenzunterschiede möglich sind.
• Da PKA eine kritische Rolle bei der Signalübertragung spielt, kann die Phosphorylierung an Ser99 dynamisch sein; berücksichtigen Sie die Stimulation oder Hemmung von cAMP-Signalwegen bei der Versuchsplanung.

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