Phospho-PKA C-alpha (PRKACA)-T197 Kaninchen-pAb - P17612

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PKA C-alpha Funktion und Lokalisierung

• Die cAMP-abhängige Proteinkinase-katalytische Untereinheit Alpha (PRKACA) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die zahlreiche Substrate als Reaktion auf cAMP phosphoryliert und wichtige zelluläre Prozesse einschließlich Stoffwechsel, Transkription und Zellzyklus reguliert (PubMed:15642694, PubMed:15905176, PubMed:16387847). Verwandte Referenzen: PMID:15642694 PMID:15905176 PMID:16387847
• PRKACA lokalisiert in mehreren subzellulären Kompartimenten, einschließlich Zytoplasma, Zellkern, Zellmembran, Mitochondrium und Zilien, was eine räumlich begrenzte Signalübertragung ermöglicht.
• Es existieren zwei Isoformen: Isoform 1 ist ubiquitär exprimiert, während Isoform 2 spermien-spezifisch ist und in Pachytän-Spermatozyten angereichert ist, was unterschiedliche Gewebefunktionen widerspiegelt.
• Die Kinase wird durch cAMP-vermittelte Dissoziation von regulatorischen Untereinheiten und durch Phosphorylierung reguliert; sie ist ein Phosphoprotein mit mehreren Modifikationsstellen.
• PRKACA wirkt als Schlüsselinhibitor des Smoothened-Signalwegs durch Phosphorylierung von GLI-Transkriptionsfaktoren und verhindert deren transkriptionelle Aktivierung in Abwesenheit von Hedgehog-Liganden (PubMed:16705181). Verwandte Referenzen: PMID:16705181
• Mutationen in PRKACA sind mit dem Cushing-Syndrom assoziiert, was seine kritische Rolle in der endokrinen Regulation verdeutlicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das den T197-Bereich abdeckt; Da es sich um einen phospho-spezifischen Antikörper handelt, sollte die Spezifität durch die Verwendung von Phosphatase-behandelten Lysaten zusammen mit positiven Kontrollen validiert werden.
• Für WB-Anwendungen ist eine einzelne Bande bei ca. 41 kDa zu erwarten; Fügen Sie Phosphataseinhibitoren den Lysepuffern hinzu, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ist berichtet; Eine Sequenzabgleichung des T197-Motivs über die Arten hinweg wird empfohlen, um die Erhaltung des Epitops zu bestätigen.
• ELISA-Experimente können von der Beschichtung mit dem Phospho-Peptid und der Verwendung eines nicht-phosphorylierten Peptids als Negativkontrolle profitieren, um die Phospho-Selektivität sicherzustellen.

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