Phospho-p70 S6 Kinase 1-T421/S424 Kaninchen-mAk für WB, IF/ICC, ELISA - P23443

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RPS6KB1 (p70 S6 Kinase 1) Funktion und Lokalisation

• RPS6KB1 (p70 S6 Kinase 1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als wichtiger nachgeschalteter Effektor des mTOR-Signalwegs fungiert und Zellwachstum, -proliferation und -überleben reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156
• Die Kinase wird durch Multisite-Phosphorylierung aktiviert, wobei die mTORC1-vermittelte Phosphorylierung an Thr-421/Ser-424 (in der autoinhibitorischen Domäne) eine kritische Rolle bei ihrer Aktivierung spielt. Bei mitogener Stimulation löst diese Phosphorylierung die Dissoziation vom EIF3-Translationsinitiationskomplex und die anschließende Kinaseaktivierung aus. Verwandte Referenzen: PMID:16286006
• Sie fördert die Proteinsynthese durch Phosphorylierung von Komponenten der Translationsmaschinerie, einschließlich EIF4B, RPS6 und EEF2K, und verbessert die Translationsinitiation durch Inaktivierung des EIF4A-Repressors PDCD4. Verwandte Referenzen: PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156, PMID:17053147
• RPS6KB1 beteiligt sich an der Rückkopplungsregulation der mTOR-Signalgebung durch Phosphorylierung von mTORC2-Komponenten MAPKAP1/SIN1 und RICTOR sowie der mTORC1-Komponente DEPTOR und moduliert so die AKT1-Aktivität. Verwandte Referenzen: PMID:15899889, PMID:19720745, PMID:19935711, PMID:22017876
• Sie vermittelt Zellüberleben durch Phosphorylierung und Hemmung des pro-apoptotischen Proteins BAD und durch Regulierung der mitochondrialen URI1-PPP1CC-Komplexdynamik. Verwandte Referenzen: PMID:17936702
• Subzellulär lokalisiert es im Zytoplasma, Zellkern, Mitochondrien und an der mitochondrialen Außenmembran sowie in synaptischen Kompartimenten, was seine vielfältigen regulatorischen Rollen widerspiegelt.
• Das Protein wird in humanen Geweben weit verbreitet exprimiert, was seine grundlegende Rolle in der zellulären Homöostase unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot wird eine Bande von etwa 59 kDa erwartet. Validieren Sie die Spezifität mit Phosphatase-behandelten Lysaten oder durch Wettbewerb mit nicht-phosphoryliertem Peptid.
• Bei der Immunfluoreszenz optimieren Sie die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen, um das Phospho-Epitop zu erhalten; erwägen Sie, Serumverarmung und Stimulationsbehandlungen zu testen, um aktivierungsabhängige Lokalisationsänderungen sichtbar zu machen.
• Für ELISA-Anwendungen beschichten Sie mit dem Ziel-Phosphopeptid oder verwenden Sie ein Sandwich-Format zum Einfangen und Nachweisen von Phospho-p70 S6K, wobei sichergestellt wird, dass der Nachweisantikörper die spezifische Phosphorylierung erkennt.
• Wenn Sie Anwendungen auf Maus- oder Rattenproben ausweiten, verifizieren Sie die Kreuzreaktivität im relevanten Gewebe oder der Zelllinie, da Sequenzhomologien die Bindung beeinflussen können.
• Das Immunogen-Design (synthetisches Phosphopeptid um T421/S424) gewährleistet Phospho-Spezifität; bestätigen Sie dies immer durch Behandlung von Proben mit Lambda-Phosphatase oder durch Verwendung einer Nicht-Phospho-Antikörperkontrolle.

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