Phospho-p70 S6 Kinase 1-T389 Kaninchen-pAk - P23443

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Ribosomales Protein S6-Kinase Beta-1 Funktion und Lokalisierung

• RPS6KB1 kodiert die 70 kDa ribosomale Protein S6-Kinase Beta-1 (p70S6K), auch bekannt als S6K1, p70 S6-Kinase Alpha oder Serin/Threonin-Proteinkinase 14A (STK14A).
• Die Kinase wirkt als ein wichtiger downstream-Effektor von mTORC1 und reguliert die Proteinsynthese und das Zellwachstum. Nach mitogener Stimulation dissoziiert die mTORC1-vermittelte Phosphorylierung p70S6K vom EIF3-Komplex, wodurch es in die Lage versetzt wird, Translationsfaktoren wie EIF4B und PDCD4 zu phosphorylieren und so die cap-abhängige Translationsinitiation zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:16286006 PMID:17053147
• p70S6K1 trägt zum Zellüberleben bei, indem es das pro-apoptotische Protein BAD durch Phosphorylierung inaktiviert. Darüber hinaus phosphoryliert es mitochondriales URI1 und stört den URI1-PPP1CC-Komplex; das freigesetzte PPP1CC dephosphoryliert p70S6K1 bei Thr-412 und erzeugt so eine negative Rückkopplungsschleife für die Anti-Apoptose-Signalgebung. Verwandte Referenzen: PMID:17936702
• Die Kinase übt eine negative Rückkopplung auf die mTORC2/AKT1-Signalgebung aus, indem sie Komponenten von mTORC2 (SIN1, MTOR, RICTOR) phosphoryliert, und steuert zudem die mTORC1-Aktivität durch Phosphorylierung von DEPTOR. Verwandte Referenzen: PMID:15899889 PMID:19720745 PMID:19935711 PMID:22017876
• p70S6K1 vermittelt TNF-induzierte Insulinresistenz durch Phosphorylierung von IRS1 an mehreren Serinresten, was es für den Abbau markiert. Verwandte Referenzen: PMID:18952604
• Es phosphoryliert und aktiviert CAD, das geschwindigkeitsbestimmende Enzym der de-novo-Pyrimidinsynthese, und koppelt so die mTOR-Signalgebung an den Nukleotidstoffwechsel. Verwandte Referenzen: PMID:23429703
• Das Protein lokalisiert sich in mehrere subzelluläre Kompartimente, einschließlich Zytoplasma, Zellkern, äußerer Mitochondrienmembran und Synapse/Synaptosom. Es ist weit verbreitet exprimiert und unterliegt alternativem Spleißen und verschiedenen posttranslationalen Modifikationen (z. B. Phosphorylierung, Acetylierung).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting wird eine Bande erwartet, die dem Zielprotein bei ca. 59 kDa entspricht. Fügen Sie Phosphatase-Inhibitoren den Lysespuffern hinzu, um den Phosphorylierungsstatus zu erhalten.
• Um die Phospho-Spezifität zu bestätigen, ziehen Sie in Betracht, einen Dephosphorylierungsassay mit Lambda-Phosphatase durchzuführen oder eine Konkurrenz mit dem nicht-phosphorylierten Peptid.
• Für IHC-P optimieren Sie die Antigen-Retrieval-Bedingungen und die Antikörpertitration; die Einbeziehung geeigneter positiver und negativer Kontrollen wird empfohlen.
• In ELISA beschichten Sie die Platte mit dem phosphorylierten Immunogenpeptid und validieren die Signallinearität über eine Verdünnungsreihe.

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