Phospho-NFKB1 (S337) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P19838

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NFKB1-Funktion und -Lokalisierung

• NFKB1 kodiert das p105-Vorläuferprotein, das eine co- und posttranslationale, proteasomvermittelte Verarbeitung durchläuft, um die aktive p50-Untereinheit zu erzeugen. p50 bildet Homo- oder Heterodimere mit anderen NF-κB-Familienmitgliedern (RELA, RELB, REL, NFKB2). Verwandte Referenzen: PMID:1423592
• Der p65-p50-Heterodimer ist das am stärksten verbreitete NF-κB-Komplex und wirkt als transkriptioneller Aktivator durch Bindung an κB-Konsensusstellen (5′-GGRNNYYCC-3′) in den Enhancern von Immun- und Akutphasen-Reaktionsgenen. Verwandte Referenzen: PMID:1740106 PMID:7830764
• Der p50-p50-Homodimer fungiert als transkriptioneller Repressor, kann aber zu einem Aktivator wechseln, wenn er mit BCL3 assoziiert ist. NFKB1 p105 hält ebenfalls NF-κB-Proteine im Zytoplasam zurück und steuert so deren nukleären Translokation.
• Die NF-κB-Signalübertragung ist streng durch posttranslationale Modifikationen reguliert, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, S-Nitrosylierung und Ubiquitinierung. NFKB1 ist ein Phosphoprotein; Phosphorylierungsereignisse modulieren seine Stabilität, Verarbeitung und transkriptionelle Aktivität.
• NFKB1 ist weit verbreitet exprimiert, insbesondere in Immunzellen, und spielt eine zentrale Rolle bei Entzündungen, Immunität, Apoptose und Zellproliferation.
• Das Protein lokalisiert sich hauptsächlich im Zytoplasma ruhender Zellen. Nach Aktivierung und Abbau der IκB-Inhibitoren translozieren die freigesetzten Dimere in den Zellkern, um die Expression der Zielgene zu induzieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um S337 von menschlichem NFKB1. Um das Phosphorylierungssignal während der Probenvorbereitung zu erhalten, fügen Sie Phosphatase-Inhibitoren den Lysepuffern hinzu und vermeiden Sie längere Inkubationen bei erhöhten Temperaturen.
• Für den Western Blot sind Hauptbanden bei ~50 kDa (p50-Untereinheit) und ~105 kDa (p105-Vorläufer) zu erwarten. Aufgrund der Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-Orthologen kann es in diesen Spezies verwendet werden, aber die optimale Verdünnung sollte empirisch ermittelt werden.
• Der Antikörper wurde für WB und ELISA validiert. Führen Sie bei Durchführung eines ELISA ein Sandwich-Format oder einen kompetitiven Assay-Design in Betracht und überprüfen Sie die Spezifität unter Verwendung von nicht-phosphorylierten Peptidkontrollen.
• Die NF-κB-Aktivierung kann durch eine Vielzahl von Stimuli (z. B. TNF-α, LPS, IL-1β) induziert werden. Wenn möglich, fügen Sie positive Kontrollen von stimulierten Zellen sowie eine dephosphorylierte oder phosphatase-behandelte Probe hinzu, um die Phosphorylierungsabhängigkeit zu bestätigen.

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