Phospho-NF2-S518 Kaninchen-pAk - P35240

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: NF2-Funktion und -Lokalisierung

• NF2 kodiert Merlin (Moesin-ezrin-radixin-ähnliches Protein), auch bekannt als Schwannomin, ein Mitglied der ERM-Proteinfamilie (Ezrin/Radixin/Moesin), das das Aktin-Zytoskelett mit Membranproteinen verbindet.
• Merlin fungiert als Tumorsuppressor durch Regulation des Hippo/SWH-Signalwegs; es fördert die Phosphorylierung der LATS1/2-Kinasen, um die Zellproliferation einzuschränken und Apoptose einzuleiten.
• Es kann die Zellmembran stabilisieren und die PI3-Kinase-Signalgebung hemmen, indem es an AGAP2 bindet und dessen stimulierende Aktivität beeinträchtigt.
• Merlin unterdrückt die Tumorgenese durch Hemmung des CUL4A-RBX1-DDB1-VprBP/DCAF1 E3-Ubiquitin-Protein-Ligase-Komplexes und verhindert den Abbau pro-apoptotischer Faktoren.
• Subzellulär lokalisiert Merlin an die Plasmamembran an Filopodien und Membranfalten (Ruffles) sowie im Zytoplasma, perinukleären Bereich, zytoplasmatischen Granula, Zellkern und Zytoskelett, was dynamische Rollen bei der Kontaktinhibition widerspiegelt.
• Das Protein ist weit verbreitet exprimiert; es existieren mehrere Isoformen, wobei Isoform 1 und 3 überwiegen und andere gewebsspezifische Muster zeigen (z. B. Netzhaut, fetale Gewebe).
• Eine wichtige posttranslationale Modifikation ist die Phosphorylierung an Ser518, die ihre Konformation und Tumorsuppressor-Aktivität moduliert, wie durch das UniProt-Schlüsselwort „Phosphoprotein“ widergespiegelt wird.
• Merlin ist mit der Krankheit Neurofibromatose Typ 2 (NF2) assoziiert; Mutationen in diesem Gen verursachen Taubheit. Es ist als Mitglied des Referenzproteoms und als Tumorsuppressor aufgeführt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein phosphoryliertes Peptid um Serin 518 hergestellt; es wird erwartet, dass er spezifisch die phosphorylierte Form von NF2/Merlin erkennt. Fügen Sie Phosphatase-Inhibitoren den Lysepuffern hinzu, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Für das Western Blotting sollte ein Band bei ca. 70 kDa beobachtet werden. Um die Phospho-Spezifität zu bestätigen, erwägen Sie eine Behandlung der Proben mit Lambda-Phosphatase oder die Verwendung einer nicht-phosphorylierten Peptid-Kompetitionskontrolle.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) validieren Sie den Antikörper in Gewebeschnitten, die bekanntermaßen phosphoryliertes Merlin exprimieren, wie z. B. menschliche Schwannome oder normale Hirngewebe, und schließen Sie eine Isotyp-Kontrolle ein.
• ELISA-Anwendungen können unter Verwendung des phosphorylierten Peptids als Beschichtungsantigen durchgeführt werden; ein nicht-phosphoryliertes Peptid kann als Negativkontrolle dienen.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ist berichtet; aufgrund der Sequenzkonservierung sollte jedoch die Leistung in jedem relevanten Probenystem der Spezies überprüft werden.

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