Phospho-NF-κB p65/RelA (Ser468) Kaninchen polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q04206

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von NF-κB p65/RelA

• NF-κB p65 (auch bekannt als RelA, NFKB3) ist eine Untereinheit des NF-κB-Transkriptionsfaktorkomplexes und gehört zur Proteinfamilie mit Rel-Homologie-Domäne, zu der RELA, RELB, REL, NFKB1/p105 und NFKB2/p52 gehören.
• Das kanonische NF-κB-Heterodimer RELA-NFKB1 bindet an κB-DNA-Stellen, um Gene zu aktivieren, die an Entzündungen, Immunität, Zellwachstum, Differenzierung und Apoptose beteiligt sind.
• p65/RelA bildet sowohl aktivierende Heterodimere (z. B. RELA-NFKB1) als auch Homodimere (RELA-RELA), wobei letztere an der invasinvermittelten IL-8-Expression beteiligt sind.
• Die subzelluläre Lokalisation ist im inaktiven Zustand hauptsächlich zytoplasmatisch, gebunden an IκB-Inhibitoren; nach Aktivierung transloziert es in den Zellkern, um die Transkription zu regulieren.
• p65 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung, Ubiquitinierung und S-Nitrosylierung, die seine Aktivität und Stabilität modulieren.
• Die Phosphorylierung an Ser468 (und anderen Resten) ist an der Feinabstimmung der Transkriptionsaktivität und Proteininteraktionen beteiligt.
• RelA ist essenziell für die Expression von T-Zell-Zytokingenen. Verwandte Referenzen: PMID:15790681
• Wirkt als Schlüsseltranskriptionsfaktor in der Interferonantwort während einer SARS-CoV-2-Infektion. Verwandte Referenzen: PMID:33440148

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phosphopeptid um Ser468 hergestellt; daher erkennt er spezifisch die phosphorylierte Form von p65/RelA. Für eine genaue Detektion fügen Sie Phosphatase-Inhibitoren zu Lyse- und Waschpuffern hinzu.
• Um die Phosphospezifität zu bestätigen, behandeln Sie Proben mit Lambda-Proteinphosphatase und vergleichen Sie die Bandensignale per WB; ein Signalverlust zeigt eine Phosphorylierungsabhängigkeit an.
• Führen Sie für WB die SDS-PAGE unter reduzierenden Bedingungen durch und verwenden Sie geeignete Kontrollen (z. B. unbehandelte vs. stimulierte Zelllysate, bei denen eine NF-κB-Aktivierung bekannt ist).
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; validieren Sie die Paarung mit einem nicht-phosphospezifischen p65-Antikörper für den Sandwich-ELISA.
• Berücksichtigen Sie die angegebene Kreuzreaktivität mit Rattenproben; validieren Sie dies jedoch in Ihrem spezifischen experimentellen Modell.

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