Phospho-MLKL-S441 Kaninchen pAb für WB und ELISA - Q9D2Y4

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von MLKL

• Pseudokinasefunktion und Aktivierung bei der Nekroptose: MLKL ist eine Pseudokinase, die keine intrinsische Kinaseaktivität aufweist und als kritischer Effektor der TNF-induzierten Nekroptose dient. Nach Phosphorylierung durch RIPK3 homotrimerisiert es, lokalisiert sich zur Plasmamembran und löst nekrotischen Zelltod durch Kalziumeinstrom und Membranschäden aus. Zugehörige Referenzen: PMID:23835476 PMID:24012422 PMID:24019532
• Nukleärer Nekroptoseweg: MLKL vermittelt auch nukleäre Nekroptose als Reaktion auf virale Infektionen, wobei die Phosphorylierung durch nukleäres RIPK3 die Kernhülle zerstört und DNA ins Zytosol freisetzt. Zugehörige Referenzen: PMID:32200799 PMID:32296175
• Inositolphosphatbindung: Die Bindung an hochphosphorylierte Inositolphosphate (z. B. InsP6) ist essenziell für die nekroptotische Funktion von MLKL.
• Subzelluläre Lokalisation: MLKL lokalisiert sich im Zytoplasma, an der Zellmembran und im Zellkern.
• Gewebeexpressionsmuster: Hoch exprimiert in Thymus, Dickdarm, Dünndarm, Leber, Milz und Lunge; gering expressioniert in Herz, Skelettmuskel und Niere; nicht im Gehirn nachweisbar.
• Alternatives Spleißen: Das Mlkl-Gen unterliegt alternativem Spleißen, wodurch mehrere Isoformen entstehen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot induzieren Sie Nekroptose in Zell- oder Gewebslysaten (z. B. TNF + Caspase-Inhibitor), um phosphoryliertes MLKL anzureichern; fügen Sie während der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren hinzu und bestätigen Sie die Bande bei ~54 kDa.
• Für ELISA verwenden Sie das phosphorylierte Peptid als Beschichtungsantigen und validieren Sie die Spezifität mit einem nicht phosphorylierten Gegenstück; Kreuzreaktivität gegenüber Mensch und Ratte sollte in den jeweiligen Probenystemen überprüft werden.
• Berücksichtigen Sie phosphospezifische Validierungsprotokolle wie die Phosphatasebehandlung, um die Spezifität des Signals zu bestätigen.

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