Phospho-MLKL-S345 Kaninchen mAb für WB, IP, ELISA - Q9D2Y4

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des Mixed lineage kinase domain-like Protein

• Mixed lineage kinase domain-like Protein (MLKL) ist eine Pseudokinase, die für den nekroptotischen Zelltod entscheidend ist. Es kann eine alternative Spleißisoform existieren.
• MLKL ist der terminale Effektor der TNF-induzierten Nekroptose. Nach Phosphorylierung durch RIPK3 bildet es Homotrimere, transliziert zur Plasmamembran und löst Kalziumeinstrom sowie Plasmamembranruptur aus, wodurch die programmierte Nekrose ausgeführt wird. Verwandte Referenzen: PMID:23835476, PMID:24012422, PMID:24019532
• Trotz seiner kinäsenähnlichen Domäne fehlt MLKL die Protein-Kinase-Aktivität und sie fungiert als Pseudokinase. Verwandte Referenzen: PMID:24012422
• Als Reaktion auf eine Orthomyxovirus-Infektion kann nukleäres MLKL durch ZBP1 und RIPK3 aktiviert werden, was zu einer Zerstörung der Kernhülle und dem Austritt von immunogener DNA ins Zytosol führt. Verwandte Referenzen: PMID:32200799, PMID:32296175
• MLKL ist überwiegend zytoplasmatisch, kann aber je nach Aktivierungszustand mit der Zellmembran und dem Kern assoziieren.
• MLKL wird stark in Thymus, Dickdarm, Dünndarm, Leber, Milz und Lunge exprimiert, mit niedrigeren Spiegeln in Skelettmuskel, Herz und Niere, und ist im Gehirn nicht vorhanden.
• MLKL enthält eine Coiled-Coil-Domäne und eine ATP-Bindungsstelle, obwohl es keine Kinaseaktivität aufweist. Es ist ein Phosphoprotein, das durch multiple Phosphorylierungsereignisse reguliert wird.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das dem Maus-MLKL S441 entspricht; bestätigen Sie die Antikörperspezifität durch Behandlung der Proben mit Lambda-Phosphatase oder durch Wettbewerb mit nicht phosphoryliertem Peptid.
• Für Western Blot ist eine Bande um 54 kDa zu erwarten. Verwenden Sie geeignete Positivkontrollen wie mit nekroptotischen Stimuli behandelte Maus-Zelllysate (z. B. TNF+ZVAD+SMAC-Mimetikum).
• Bei der Immunpräzipitation werden Vorreinigung und optimierte Antikörper:Lysat-Verhältnisse empfohlen, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Die ELISA-Leistung kann von den Beschichtungsbedingungen abhängen; testen Sie sowohl das direkte als auch das Sandwich-ELISA-Format.

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