Phospho-MAP2K4-T261 Kaninchen pAb - P45985

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von MAP2K4

• MAP2K4 (auch bekannt als MEK4, MKK4, SEK1, JNKK1, neben weiteren Aliasnamen) ist eine dual-spezifische Proteinkinase, die als Schlüsselkomponente der Mitogen-aktivierten Protein-(MAP-)Kinase-Signalkaskade fungiert.
• Es ist eine essentielle Kinase im stressaktivierten Proteinkinase/c-Jun N-terminalen Kinase (SAP/JNK)-Weg, die JNKs (MAPK8/JNK1, MAPK9/JNK2, MAPK10/JNK3) und auch die p38-MAPKs (MAPK11, MAPK12, MAPK13, MAPK14) direkt phosphoryliert und aktiviert.
• MAP2K4 phosphoryliert bevorzugt den Tyrosinrest innerhalb des Thr-Pro-Tyr-Motivs von JNKs, während MAP2K7 den Threoninrest targetiert; gemeinsam aktivieren sie JNKs synergistisch als Reaktion auf verschiedene Stimuli.
• Diese Kinase ist für die Erhaltung der peripheren Lymphhomöostase erforderlich und ist an der mitochondrialen Todessignalisierung beteiligt, einschließlich der Cytochrom-c-Freisetzung, die zur Apoptose führt.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst sowohl das Zytoplasma als auch den Zellkern, was mit seiner Rolle bei der Signaltransduktion von der Zelloberfläche zum Zellkern übereinstimmt.
• MAP2K4 wird breit in Geweben exprimiert, wobei eine besonders reichliche Expression im Skelettmuskel beobachtet wird.
• Das Protein erfährt mehrere posttranslationale Modifikationen, darunter Acetylierung, Methylierung und Phosphorylierung, die seine Aktivität regulieren, und es unterliegt alternativem Spleißen.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Als phosphospezifischer Antikörper, der gegen ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um Thr261 herum erzeugt wurde, ist es entscheidend, bei der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren zu den Lysepuffern hinzuzufügen, um den Phosphorylierungszustand von endogenem MAP2K4 zu erhalten.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität durch Behandlung von Zelllysaten mit Lambda-Phosphatase; eine erfolgreiche Dephosphorylierung sollte das Signal eliminieren, falls der Antikörper streng die phospho-T261-Form erkennt.
• Für das Western Blotting beträgt das erwartete Molekulargewicht ungefähr 44 kDa; verwenden Sie geeignete Gelprozente und Transferbedingungen für diesen Größenbereich.
• Kreuzreaktivität wird basierend auf der Sequenzhomologie der Immunogenregion für Mensch, Maus und Ratte vorausgesagt; dennoch wird eine Verifizierung in der relevanten Spezies empfohlen.
• Bei ELISA-Anwendungen können Sie diesen Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwenden und optimieren Sie Beschichtungs- und Detektionsbedingungen empirisch mit phosphorylierten Peptid- oder Proteinstandards.

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