Phospho-IRS1-S312 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper für Western Blot - P35568

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von IRS1

• Insulinrezeptorsubstrat 1 (IRS1) ist ein entscheidendes Signaladapterprotein, das die Signaltransduktion vom Insulinrezeptor (INSR) und Insulin-ähnlichen Wachstumsfaktor-I-Rezeptor (IGF1R) vermittelt und essentielle Rollen bei Entwicklung, Wachstum, Glukosehomöostase und Lipidstoffwechsel spielt. Verwandte Referenzen: PMID:7541045, PMID:19639489
• Nach Phosphorylierung durch aktivierten Insulinrezeptor fungiert IRS1 als Docking-/Gerüstprotein, das SH2-Domänen enthaltende Proteine wie die p85-Regulatoruntereinheit von PI3K, NCK1, NCK2, GRB2 und SHP2 rekrutiert, um nachgeschaltete Signale weiterzuleiten. Verwandte Referenzen: PMID:11171109, PMID:8265614
• Die Rekrutierung des GRB2-SOS1-Komplexes führt zur Aktivierung der Ras/Raf/MEK/MAPK-Kaskade, während die Aktivierung des PI3K/AKT-Signalwegs die meisten metabolischen Effekte von Insulin vermittelt; beide Signalwege wirken zusammen, um Genexpression, Zellwachstum und Differenzierung zu regulieren.
• IRS1 wirkt zudem als positiver Regulator des Wnt/β-Catenin-Signalwegs, indem es die autophagievermittelte Degradation von DVL2 unterdrückt und dadurch die Zellproliferation fördert. Verwandte Referenzen: PMID:24616100
• IRS1 ist sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern lokalisiert, was mit seinen Rollen bei Signalgebung und Genregulation übereinstimmt.
• Das Protein unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, Ubiquitinierung und S-Nitrosylierung, die seine Aktivität und Stabilität fein regulieren; Schlüsselbegriffe sind Phosphoprotein, Ubl-Konjugation und Diabetes mellitus.
• Mutationen oder Dysregulation von IRS1 sind mit Insulinresistenz und Typ-2-Diabetes assoziiert, was seine Bedeutung für Stoffwechselerkrankungen unterstreicht.
• Humanes IRS1 hat eine berechnete Molekularmasse von etwa 131,6 kDa und wandert bei SDS-PAGE bei ungefähr 132 kDa.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein phosphospezifisches Peptid, das Sequenzen rund um Serin 312 von humanem IRS1 entspricht. Die Spezifität für die phosphorylierte Form sollte bestätigt werden; erwägen Sie die Verwendung von phosphatasebehandelten Lysaten oder die Blockierung mit nicht phosphoryliertem Peptid bei Ihrer Validierung.
• Der Western Blot-Nachweis von IRS1 ergibt typischerweise eine Bande um 132 kDa; verwenden Sie geeignete Molekulargewichtsmarker und berücksichtigen Sie das bekannte Wanderungsverhalten des Proteins.
• Für phosphoryliertes IRS1 führt eine Behandlung von Zellen mit Insulin oder IGF-1 vor der Lyse erwartungsgemäß zu einer Signalverstärkung; optimieren Sie Stimulationszeit und Konzentration für Ihr System.
• Dieser Antikörper zeigt laut Herstellerangaben Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-IRS1; validieren Sie ihn im entsprechenden Probensystem mit geeigneten Kontrollen.
• Aufgrund der Empfindlichkeit von Phospho-Epitopen vermeiden Sie aggressives Stripping und erneutes Sonden von Membranen; falls erforderlich, überprüfen Sie, dass das Phospho-Signal nicht verloren geht.

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