Phospho-IRE1-S724 Kaninchen pAb - O75460

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: IRE1-Funktion und -Lokalisierung

• IRE1 (auch bekannt als ERN1, IRE1α) ist eine dualfunktionale Serin/Threonin-Proteinkinase und Endoribonuklease, die als primärer Sensor für die endoplasmatische Retikulum-Antwort auf ungefaltete Proteine (UPR) fungiert. Verwandte Referenzen: PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535
• In nicht gestressten Zellen wird IRE1 durch Bindung an das ER-Chaperon HSPA5/BiP in einem inaktiven monomeren Zustand gehalten. Verwandte Referenzen: PMID:21317875
• Bei Anhäufung von fehlgefalteten Proteinen dissoziiert HSPA5/BiP, was die IRE1-Homodimerisierung und trans-Autophosphorylierung der Kinasedomäne ermöglicht, wodurch die Endoribonuklease-Funktion aktiviert wird. Verwandte Referenzen: PMID:21317875
• Die Endoribonuklease-Domäne spaltet spezifisch XBP1-mRNA und entfernt ein 26-Nukleotid-langes Intron, um gespleißtes XBP1 (XBP1s) zu erzeugen. Verwandte Referenzen: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• XBP1s kodiert für einen potenten Transkriptionsfaktor, der Gene hochreguliert, die an der ER-Proteinfaltung, Qualitätskontrolle und dem Abbau beteiligt sind, und stellt so die ER-Homöostase wieder her. Verwandte Referenzen: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• Über das XBP1-Spleißen hinaus reguliert IRE1 auch unkonventionelle Proteinsekretionswege, wie z. B. den ER-Stress-induzierten Transport von CFTR zur Zellmembran über GORASP2 und SEC16A. Verwandte Referenzen: PMID:21884936, PMID:28067262
• IRE1 wird ubiquitär exprimiert, mit besonders hohen Spiegeln im Pankreasgewebe, was die hohe sekretorische Anforderung von Pankreaszellen widerspiegelt.
• Als endoplasmatisches Retikulum-Membranprotein erfasst die N-terminale luminale Domäne von IRE1 den ER-Stress, während seine cytosolische C-terminale Region die Kinase- und Endoribonuklease-Aktivitäten beherbergt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein phosphoryliertes Peptid hergestellt, das der S724-Region von humanem IRE1α entspricht. Um die Phospho-Spezifität zu überprüfen, ziehen Sie eine λ-Phosphatase-Behandlung der Proben vor der Western-Blot-Analyse in Betracht.
• Bei der WB wandert IRE1 bei etwa 110 kDa. Stellen Sie eine gründliche Membranblockierung sicher und schließen Sie geeignete positive (ER-gestresste Zelllysate) und negative (ungestresste Zellen) Kontrollen ein, um die Bandenidentität zu bestätigen.
• Bei IHC-P kann eine Optimierung der Antigen-Retrieval-Bedingungen erforderlich sein. Schließen Sie eine Isotypenkontrolle ein und validieren Sie die Färbemuster anhand der bekannten IRE1-Gewebeverteilung.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-IRE1 wird berichtet; es wird jedoch empfohlen, die Epitopsequenz um S724 abzugleichen, um die Konservierung in diesen Spezies zu bestätigen.
• Als polyklonaler Kaninchenantikörper kann die Leistung von Charge zu Charge variieren. Validieren Sie jede neue Charge in Ihrem spezifischen Assay-System, um Konsistenz sicherzustellen.

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