Phospho-IRAK4-Ser346 Kaninchen-mAb für WB, ELISA - Q9NWZ3

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: IRAK4-Funktion und -Lokalisierung

• IRAK4 (Interleukin-1-Rezeptor-assoziierter Kinase 4), auch bekannt als Nierenkarzinom-Antigen NY-REN-64, wird vom IRAK4-Gen kodiert. Aufgrund von alternatives Spleißen existieren mehrere Isoformen.
• IRAK4 ist eine Serin/Threonin-Kinase, die für die Einleitung der angeborenen Immunantworten gegen Pathogene unerlässlich ist. Sie fungiert stromabwärts der Toll-like-Rezeptoren (TLRs) und IL-1R und wird schnell über MYD88 in den Myddosom-Komplex rekrutiert. Verwandte Referenzen: PMID:17878374
• Nach Aktivierung phosphoryliert IRAK4 IRAK1, stimuliert dessen Kinaseaktivität und Autophosphorylierung. Es phosphoryliert auch Pellino-E3-Ubiquitin-Ligasen (Peli1, Peli2, Peli3), um die K63-verknüpfte Polyubiquitinierung von IRAK1 zu fördern, was zur Aktivierung der TAK1- und IKK-Komplexe und zum nukleären Translokation von NF-κB führt.
• IRAK4 phosphoryliert auch TIRAP, um dessen Ubiquitinierung und Abbau zu fördern, und phosphoryliert NCF1, um die NADPH-Oxidase-Aktivität während der LPS-Stimulation zu regulieren, was zu antimikrobiellen Antworten beiträgt.
• Überwiegend im Zytoplasma lokalisiert.
• IRAK4 unterliegt einer Phosphorylierung und Acetylierung, die für seine Aktivierung und Funktion kritisch sind.
• Mutationen im IRAK4-Gen sind mit Immundefizienzstörungen (z. B. IPD1, IMD67) und Nierenkarzinom (NY-REN-64) verbunden, was seine Rolle bei der Immunabwehr und Krebs unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da dieser Antikörper spezifisch für phosphoryliertes Ser346 ist, fügen Sie während der Probenvorbereitung für Western Blots Phosphatase-Inhibitoren hinzu, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten.
• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid; erwägen Sie die Verwendung eines nicht-phosphorylierten Peptids als Negativkontrolle, um die phosphorylierungsabhängige Bindung zu bestätigen.
• Für Western Blots beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ca. 52 kDa. Sorgen Sie für eine adäquate Proteinbeladung und verwenden Sie geeignete Positivkontrollen, wie stimulierte Immunzellen.
• Für ELISA-Anwendungen entwickeln Sie ein phospho-spezifisches Nachweisprotokoll; die Kombination mit einem Gesamt-IRAK4-Antikörper kann eine ratiometrische Analyse der Phosphorylierungsgrade ermöglichen.
• Validieren Sie den Antikörper im entsprechenden menschlichen Probensystem, da die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies nicht bestimmt wurde.
• Optimieren Sie die Antikörperverdünnung und Inkubationsbedingungen für Ihren spezifischen Versuchsaufbau.

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