Phospho-INSR-Y1146/IGF1R-Y1131 Kaninchen-pAk für WB, ELISA - P06213 / P08069

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von INSR und IGF1R

• Der Insulinrezeptor (INSR) ist eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die die pleiotropen Wirkungen von Insulin nach Ligandenbindung vermittelt.
• Aktivierter INSR phosphoryliert intrazelluläre Substrate (IRS1-4, SHC), was zur Aktivierung zweier Hauptsignalwege führt: PI3K-AKT (metabolische Wirkungen) und Ras-MAPK (Zellwachstum und Differenzierung).
• Der PI3K-AKT-Signalweg fördert die Translokation des Glukosetransporters SLC2A4/GLUT4, anti-apoptotische Effekte (durch BAD-Phosphorylierung) und die mTORC1-Signalübertragung; der Ras-MAPK-Signalweg reguliert die Genexpression und kooperiert mit PI3K für das Zellwachstum.
• INSR bildet Hybridrezeptoren mit IGF1R. Hybridrezeptoren, die die INSR-Isoform "Long" enthalten, werden mit hoher Affinität durch IGF1, mit geringer Affinität durch IGF2 und nicht signifikant durch Insulin aktiviert (PubMed:12138094); solche mit der Isoform "Short" werden durch IGF1, IGF2 und Insulin aktiviert. Eine andere Studie deutet auf ähnliche Bindungseigenschaften für beide Hybridtypen hin (PubMed:16831875). Zugehörige Referenzen: PMID:12138094 PMID:16831875
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst die Zellmembran, späte Endosomen und Lysosomen, was die Internalisierung und den Transport des Rezeptors widerspiegelt.
• Die Isoformen "Long" und "Short" werden überwiegend in Insulin-Zielgeweben (Leber, Fettgewebe, Skelettmuskulatur) exprimiert und finden sich auch in verschiedenen anderen Geweben und Tumoren; die Isoform "Short" wird bevorzugt in fötalen Zellen exprimiert.
• INSR unterliegt einer Autophosphorylierung an mehreren Tyrosinresten, einschließlich Y1146, was entscheidend für die nachgeschaltete Signalweiterleitung ist.
• Zu den wichtigsten strukturellen Merkmalen gehören alternatives Spleißen, extrazelluläre Ligandenbindungsdomänen, eine Transmembran-Helix und eine intrazelluläre Tyrosinkinase-Domäne.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für den phosphospezifischen Nachweis sollten Phosphatase-Inhibitoren in den Lysepuffern enthalten sein. Validieren Sie die Spezifität, indem Sie Proben mit alkalischer Phosphatase behandeln oder eine Konkurrenzreaktion mit nicht-phosphorylierten Peptiden durchführen.
• Verwenden Sie geeignete Positivkontrollen, wie z. B. mit Insulin stimulierte Zelllinien, und überwachen Sie die Banden bei ca. 155 kDa im Western Blot.
• Optimieren Sie für ELISA die Beschichtungsbedingungen und bestätigen Sie die Linearität des Assays mit phosphorylierten Peptidstandards.
• Beachten Sie, dass der Antikörper sowohl die phosphorylierten Formen von INSR als auch von IGF1R erkennen kann; verifizieren Sie die Zielidentität in Ihrem System.

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