Phospho-Histon H3-T3 Kaninchen-pAk für WB, ELISA - Q16695 / P68431

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

• Histon H3.1t (auch als H3/g oder H3.4 bezeichnet) ist eine testisspezifische Variante des kanonischen Histons H3. Sie wird vom H3-4 (HIST3H3)-Gen kodiert und gehört zur großen Histon-H3-Familie, die zusätzliche Gene wie HIST1H3A umfasst.
• Als Kernhiston bildet H3 zusammen mit H2A, H2B und H4 das Histon-Oktamer, das das Nukleosom bildet, die fundamentale wiederkehrende Einheit des Chromatins. Nukleosomen verpacken DNA in eine kompakte Struktur, die den Zugriff auf die genetische Information einschränkt.
• Diese Komprimierung spielt eine zentrale Rolle bei der Regulierung der Transkription, der DNA-Replikation, der DNA-Reparatur und der gesamten chromosomalen Stabilität. Das kontrollierte Abwickeln oder Umbauen von Nukleosomen ermöglicht zellulären Maschinen, die DNA-Matrize zu lesen, zu kopieren oder zu reparieren.
• Die Histon-Funktion wird dynamisch durch eine komplexe Reihe posttranslationaler Modifikationen an ihren N-terminalen Schwänzen reguliert – dem „Histon-Code“. Dazu gehören Phosphorylierung (z. B. an Thr-3), Acetylierung, Methylierung und viele andere, die zusammenwirken, um den Chromatin-Zustand zu modulieren und nachgelagerte Effektorproteine zu rekrutieren.
• H3.1t lokalisiert ausschließlich im Zellkern und wird in das Chromatin integriert. Im Einklang mit seiner Rolle bei der DNA-Verpackung ist er während des gesamten Zellzyklus fest mit Chromosomen assoziiert.
• Die Expression von H3.1t ist weitgehend auf Hodenzellen beschränkt, was auf eine spezialisierte Funktion bei der Chromatin-Umorganisation während der Spermatogenese hindeutet. Andere H3-Varianten werden breiter exprimiert und erfüllen ähnliche nukleosomale Rollen in somatischen Zellen.
• Die UniProt-Schlüsselwörter für H3.1t umfassen „Phosphoprotein“, „Acetylierung“, „Methylierung“, „Citrullinierung“ und „ADP-Ribosylierung“, was die umfangreiche Modifikationslandschaft hervorhebt, die ihre Funktionen steuert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das den Thr-3-Bereich von menschlichem HIST1H3A abdeckt. Dieses Design zielt darauf ab, Antikörper zu erzeugen, die spezifisch die phosphorylierte Form von Histon H3 erkennen. Forscher sollten die Spezifität bestätigen, indem sie die Signale zwischen phosphatasebehandelten und unbehandelten Proben vergleichen.
• Der Antikörper ist für Western Blotting (WB) und ELISA validiert. Für WB können Ganzzell-Lysate oder histonangereicherte Extrakte verwendet werden, und eine Bande in der Nähe von 15 kDa wird erwartet. Die Wanderung kann je nach Modifikationsstatus von H3 variieren. Fügen Sie während der Lyse und Probenvorbereitung immer Phosphatase-Inhibitoren hinzu, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten.
• Bei ELISA sollten Sie in Betracht ziehen, die Platte mit dem phosphorylierten Peptid oder dem phosphorylierten Histon-Protein zu beschichten. Fügen Sie geeignete Kontrollen (z. B. Nicht-Phosphopeptid) ein, um die Bindungsspezifität zu bewerten.
• Die vorhergesagte Kreuzreaktivität ist breit (Mensch, Maus, Ratte und andere), da der N-terminale Schwanz von H3 bei Wirbeltieren hoch konserviert ist. Es wird jedoch empfohlen, eine Validierung in der entsprechenden Spezies und im entsprechenden Gewebe vor quantitativen Anwendungen durchzuführen.
• Für immunhistochemische oder immunzytochemische Anwendungen beachten Sie bitte, dass der Antikörper ursprünglich nicht für diese Formate entwickelt wurde; Pilottests mit geeigneter Antigen-Retrieval und Detektionsbedingungen sind ratsam.

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