Phospho-Histon H2AX-S139 Kaninchen mAb für WB, IP, IF/ICC, ELISA – P16104

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H2AX

• Histon H2AX (H2A.X) ist eine Variante des Histons H2A, die konventionelles H2A in einer Untergruppe von Nukleosomen ersetzt.
• Es spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität, indem es DNA zu Chromatin verdichtet und die DNA-Zugänglichkeit durch posttranslationale Modifikationen reguliert.
• Die Phosphorylierung an Ser139 (γ-H2AX) ist entscheidend für die Erkennung von DNA-Doppelstrangbrüchen (DSB) und die Rekrutierung von DNA-Reparaturmaschinerie, was es zu einem Schlüsselmarker für DNA-Schäden macht.
• Erforderlich für den checkpoint-vermittelten Zellzyklusarrest als Reaktion auf niedrige Dosen ionisierender Strahlung und für eine effiziente DSB-Reparatur.
• Lokalisiert im Zellkern und assoziiert mit Chromosomen.
• Unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung, die seine Funktion in der DNA-Schadensantwort feinabstimmen.
• Das Gen H2AX (H2AFX) ist Mitglied der Histon-H2A-Genfamilie und ist weithin konserviert.
• Sein vorhergesagtes Molekulargewicht beträgt etwa 15 kDa, was mit der typischen Wanderung bei SDS-PAGE übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um S139 des menschlichen Histons H2AX; für den phosphospezifischen Nachweis sollten Sie bei der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren hinzufügen.
• Um die Spezifität des Antikörpers für die phosphorylierte Form zu validieren, vergleichen Sie die Signale von unbehandelten vs. phosphatasebehandelten Lysaten.
• Für Western Blot ist eine Bande um 15 kDa zu erwarten; stellen Sie sicher, dass geeignete Molekulargewichtsmarker verwendet werden.
• Bei der Immunfluoreszenz sind γ-H2AX-Foci ein klassischer Marker für DNA-Doppelstrangbrüche; induzieren Sie DNA-Schäden beispielsweise mit Etoposid oder ionisierender Strahlung, um das Signal zu verstärken.
• Für ELISA verwenden Sie ein phosphoryliertes Peptid als Beschichtungsantigen und ein nicht phosphoryliertes Peptid als Negativkontrolle.

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