Phospho-HER2/ErbB2-Y1139 Kaninchen-mAk für WB und ELISA - P04626

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: HER2/ErbB2-Funktion und Lokalisierung

• HER2 (Rezeptor-Tyrosin-Protein-Kinase erbB-2) ist eine Protein-Tyrosin-Kinase, die Teil von Zelloberflächenrezeptorkomplexen ist und einen Korezeptor für Ligandenbindung benötigt. Sie ist essentiell für die Neuregulin-Rezeptor-Signalgebung, obwohl Neureguline nicht direkt an sie binden.
• Sie reguliert das Auswachsen und die Stabilisierung peripherer Mikrotubuli über den MEMO1-RHOA-DIAPH1-Signalweg, was zu GSK3B-Inhibierung, APC- und CLASP2-Membranassoziation und Mikrotubuli-Einfang durch MACF1 führt.
• Im Zellkern wirkt HER2 als Transkriptionsfaktor, bindet an den PTGS2/COX-2-Promotor bei 5'-TCAAATTC-3' und aktiviert dessen Transkription und ist an der CDKN1A-Aktivierung unter Beteiligung von STAT3 und SRC beteiligt.
• Sie verstärkt auch die rRNA-Transkription durch RNA-Polymerase I, fördert die Proteinsynthese und das Zellwachstum.
• Subzellulär lokalisiert HER2 an der Zellmembran, Membranausstülpungen (Ruffles), frühen Endosomen, im Zytoplasma (perinukleär) und im Zellkern, was mit ihrer doppelten Signal- und Transkriptionsrolle übereinstimmt.
• Gewebespezifität: Wird in verschiedenen Tumorgeweben exprimiert, einschließlich primärer Brusttumore und Tumore aus Dünndarm, Speiseröhre, Niere und Mund.
• Schlüsselmerkmale: Es handelt sich um ein Single-Pass-Typ-I-Membranglykoprotein mit Kinaseaktivität, das eine ATP-Bindungsstelle, Phosphorylierungsstellen und Disulfidbrücken enthält. Es ist an Chromosomenumlagerungen, alternativem Spleißen und Krankheitsvarianten beteiligt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um Tyrosin 1139 von humanem HER2 hergestellt. Für Western Blot sollten phosphorylierungsspezifische Blockierbedingungen und geeignete Phosphataseinhibitoren während der Probenvorbereitung in Betracht gezogen werden, um das Phospho-Epitop zu erhalten.
• Angesichts des vorhergesagten Molekulargewichts von 138 kDa sollten für Western-Blotting angemessene Gelelektrophorese- und Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine sichergestellt werden.
• Für ELISA wird empfohlen, die Spezifität des Antikörpers mit phosphorylierten und nicht-phosphorylierten Peptiden zu validieren. Führen Sie geeignete positive und negative Kontrollen ein, wie z. B. Lysate von HER2-überexprimierenden und Phosphatase-behandelten Zelllinien.
• Kreuzreaktivität wird für den Menschen angegeben; Reaktivität mit anderen Spezies bei Bedarf überprüfen. Da HER2 ein Transmembranrezeptor ist, sollten membrangangereicherte Fraktionen für eine verbesserte Detektion in Betracht gezogen werden.

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