Phospho-EZH2/KMT6 (T311) Kaninchen-Polyclonaler Antikörper für WB, ELISA – Q15910

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von EZH2

• EZH2 ist eine Histon-Lysin-N-Methyltransferase, auch bekannt als Enhancer of Zeste Homolog 2, ENX-1 oder KMT6, und fungiert als katalytische Untereinheit des PRC2-Komplexes.
• Der PRC2/EED-EZH2-Komplex methyliert Histon H3 an Lys-9 und Lys-27, was zur transkriptionellen Repression von Zielgenen führt. Verwandte Referenzen: PMID:14532106, PMID:15225548, PMID:15385962
• EZH2 führt zur Mono-, Di- und Trimethylierung von H3K27, mit einer Präferenz für unmethyliertes Substrat (H3K27me0) und progressiv abnehmender Aktivität auf H3K27me1 und H3K27me2. Verwandte Referenzen: PMID:15231737, PMID:17210787, PMID:18285464, PMID:22323599, PMID:30923826
• In embryonalen Stammzellen ist EZH2 häufiger vorhanden als EZH1 und essenziell für die Etablierung der H3K27me3-Markierungen, die für die Identität der Stammzelle und die korrekte Differenzierung erforderlich sind. Verwandte Referenzen: PMID:19026781
• Der PRC2-Komplex kann DNA-Methyltransferasen rekrutieren, wodurch Histonmethylierung mit DNA-Methylierung verknüpft und die Genstilllegung verstärkt wird. Verwandte Referenzen: PMID:16357870, PMID:17200670
• Bekannte Zielgene, die durch EZH2/PRC2 repressiert werden, umfassen HOXC8, HOXA9, MYT1, CDKN2A und retinsäureresponsive Gene. Verwandte Referenzen: PMID:16179254, PMID:18086877, PMID:20935635
• EZH2 methyliert auch Nicht-Histon-Proteine wie den Transkriptionsfaktor GATA4 und den Kernrezeptor RORA, wodurch sein regulatorisches Wirkungsfeld erweitert wird. Verwandte Referenzen: PMID:23063525
• Es reguliert zirkadiane Rhythmen durch Methylierung von Histon H3 an Promotoren von Uhren-Genen und erleichtert die CRY1/2-vermittelte Repression der PER1/2-Transkription.
• EZH2 ist überwiegend im Zellkern lokalisiert und wird in vielen Geweben breit exprimiert; eine Überexpression wird häufig bei Brust-, Dickdarm-, Kehlkopfkrebs, Lymphomen und Hodenkrebs beobachtet. Verwandte Referenzen: PMID:14532106
• EZH2 ist ein Phosphoprotein, und die Phosphorylierung an der Reststelle Thr311 ist eine der posttranslationalen Modifikationen, die seine Aktivität regulieren können.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das zur Erzeugung dieses Antikörpers verwendete Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das Phosphorylierung an Thr311 trägt; daher wird erwartet, dass der Antikörper spezifisch die phosphorylierte Form von EZH2 an dieser Stelle erkennt. Bestätigen Sie die Spezifität durch Vergleich der Signale in mit Phosphatase behandelten und unbehandelten Proben.
• Für den Western Blot (WB) wandert EZH2 bei etwa 85 kDa. Verwenden Sie geeignete Positivkontrollen wie HEK293T- oder HeLa-Zellen und validieren Sie den Nachweis der Phospho-T311-Form unter Bedingungen, die eine EZH2-Phosphorylierung induzieren.
• ELISA kann zur quantitativen Analyse von Phospho-EZH2-(T311)-Spiegeln eingesetzt werden; erwägen Sie die Verwendung eines Capture-Antikörpers in Kombination mit diesem pAb für einen Sandwich-ELISA.
• Kreuzreaktivität mit Ratte wurde beobachtet; daher kann dieser Antikörper für Studien an Nagetiermodellen geeignet sein. Validieren Sie in dem relevanten Gewebe- oder Zellliniensystem, um die Spezifität sicherzustellen.

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