Phospho-ESRα-S167 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P03372

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Estrogenrezeptors Alpha

• Der Estrogenrezeptor alpha (ER-alpha), codiert durch das ESR1-Gen, ist ein Steroidhormonrezeptor und Mitglied der Kernrezeptor-Unterfamilie 3 Gruppe A (NR3A1). Er fungiert als ein ligandenaktivierter Transkriptionsfaktor, der die Genexpression reguliert, die für die Zellproliferation und -differenzierung in Zielgeweben entscheidend ist.
• Nach Bindung von Estrogen unterliegt ER-alpha einer Konformationsänderung, die die Homodimerisierung und die Bindung an Estrogen-Response-Elemente (EREs) in der DNA erleichtert. Er interagiert auch mit anderen Transkriptionsfaktoren wie AP-1 (c-Jun/c-Fos) und Sp1, um ERE-unabhängige Signalvermittlung zu vermitteln. Coaktivator-Komplexe werden über LXXLL-Motive rekrutiert.
• Alternatives Spleißen und die Nutzung von Promotoren erzeugen Isoformen, denen einer oder mehrere funktionelle Domänen fehlen. Diese Isoformen können die transkriptionelle Aktivität des Volllängenrezeptors durch kompetitive DNA- oder Ligandenbindung oder durch Heterodimerisierung modulieren. Verwandte Referenzen: PMID:10970861
• ER-alpha wandert zwischen dem Zellkern, dem Zytoplasma und der Zellmembran. Er ist auch mit dem Golgi-Apparat assoziiert, was sowohl genomische als auch rasche nicht-genomische Signalwege ermöglicht, einschließlich der Aktivierung von Kinase-Kaskaden.
• Der Rezeptor unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Glykosylierung, Palmitoylierung und ubiquitin-ähnlicher Konjugation. Er enthält Zinkfinger-Motive und eine Ligandenbindedomäne mit einem Molekulargewicht von ca. 66 kDa.
• ER-alpha ist weitgehend in menschlichen Geweben exprimiert, fehlt jedoch bemerkenswerterweise in der Hypophyse. Verwandte Referenzen: PMID:10970861
• Spezifische funktionelle Rollen umfassen die Erhaltung des neuronalen Überlebens bei ischämischer Reperfusionsverletzung in Gegenwart von Estradiol und die Aktivierung von NOS3, um die Produktion von endothelialem Stickstoffmonoxid zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:21937726
• ER-alpha beteiligt sich auch an einer gegenseitigen Transrepression mit NF-kappa-B und moduliert Entzündungsreaktionen. Darüber hinaus vermittelt er eine MTA1-abhängige transkriptionelle Regulation von BRCA1 und BCAS3. Verwandte Referenzen: PMID:17922032

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches phosphoryliertes Peptid rund um Ser167 hergestellt. Verwenden Sie während der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Für Western Blots beträgt die vorhergesagte Bandengröße ~66 kDa. Validieren Sie die Detektion in menschlichen Zelllinien, die bekanntermaßen ER-alpha exprimieren, wie z. B. MCF-7.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC ist mit einer nukleären, zytoplasmatischen und membranösen Lokalisierung zu rechnen. Führen Sie eine Co-Färbung mit Kompartiment-Markern durch, um die Spezifität zu bestätigen.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, kann die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz variieren; fügen Sie positive und negative Kontrollen ein und erwägen Sie ein Blockierpeptid zur Verifizierung der Phospho-Spezifität.
• Während der Antikörper reaktiv mit menschlichen Proben ist, wurde die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies nicht getestet; bei orthologer Verwendung wird eine empirische Validierung empfohlen.
• Für ELISA kann ein phosphoryliertes Peptid als Beschichtungsantigen helfen, die Detektionsempfindlichkeit zu kalibrieren.

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