Phospho-EPHA2-Y594 Kaninchen-pAk für WB und ELISA - P29317

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EPHA2-Funktion und -Lokalisierung

• EPHA2 kodiert den Ephrin-Typ-A-Rezeptor 2, einen Rezeptor-Tyrosinkinase, der Signale bei Bindung an membrangebundene Ephrin-A-Liganden auf benachbarten Zellen überträgt und eine bidirektionale Signalisierung initiiert (vorwärts über den Rezeptor und rückwärts über den Liganden).
• Er reguliert eine Vielzahl von zellulären Prozessen, einschließlich Zellmigration, Integrin-vermittelter Adhäsion, Proliferation und Differenzierung, teilweise durch Modulation des ERK1/ERK2-Signalwegs.
• EPHA2 nimmt an Entwicklungsprozessen wie Angiogenese, Musterbildung des Hinterhirns und Verzweigungsmorphogenese in der Brustdrüse teil und trägt zur Organisation und Transparenz der Linsenfaszellen bei.
• Über die normale Physiologie hinaus fungiert EPHA2 als Rezeptor für das Hepatitis-C-Virus (HCV) und das humane Zytomegalievirus (HCMV) und vermittelt den Eintritt von Viren in Wirtszellen.
• Das Protein ist an der Zellmembran lokalisiert mit einer Anreicherung in dynamischen Zellfortsätzen, einschließlich Ruffle-Membranen, Lamellipodien und fokalen Adhäsionen, was seinen Rollen bei der Zelladhäsion und -motilität entspricht.
• EPHA2 ist stark in epithelreichen Geweben wie Haut, Darm, Lunge und Eierstock exprimiert und wird auch in Gehirn- und Gliomzelllinien nachgewiesen.
• Wichtige strukturelle Merkmale umfassen eine extrazelluläre Ephrin-Bindedomäne, eine Single-Pass-Transmembrandomäne und eine intrazelluläre Kinasedomäne mit der phosphorylierbaren Tyrosinreststelle Y594.
• EPHA2 wird unter mehreren funktionellen Schlagworten klassifiziert: Tyrosin-Proteinkinase, ATP-Bindung, Rezeptor, Glykoprotein, alternatives Spleißen und Angiogenese, was seine zentrale Rolle bei der Signaltransduktion und Krankheit unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das Y594 umfasst, was eine hohe Spezifität für die phosphorylierte Form bieten sollte – bestätigen Sie die Spezifität durch Behandlung der Proben mit λ-Phosphatase vor dem Western Blot.
• Führen Sie für das Western Blotting Phosphataseinhibitoren während der Lyse durch und erwägen Sie die Verwendung positiver Kontrollen wie Ephrin-A1-stimulierter Zellen oder epithelialer Krebszelllinien, die bekanntermaßen EPHA2 überexprimieren.
• Aufgrund der berichteten Kreuzreaktivität mit Ratte kann dieser Antikörper für Studien in Rattenmodellen geeignet sein; validieren Sie jedoch die Reaktivität und die optimale Verdünnung in Ihrem spezifischen Probensystem.
• Verwenden Sie im ELISA ein direktes oder indirektes Format mit Phospho-EPHA2-Fangantigen; die Assay-Bedingungen sollten empirisch für die Beschichtungskonzentration und die Verdünnung des Nachweisantikörpers optimiert werden.
• Beachten Sie, dass das vorhergesagte Molekulargewicht von EPHA2 ca. 108 kDa beträgt – führen Sie stets geeignete Molekulargewichtsmarker und überprüfen Sie die Bandengröße.

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