Phospho-eNOS-S1177 Kaninchen-pAb für WB, ELISA - P29474

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: eNOS-Funktion und -Lokalisierung

• Stickstoffmonoxid-Synthase 3 (eNOS) ist ein endothelspezifisches Enzym, das die Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) katalysiert, einem wichtigen Signalmolekül im Herz-Kreislauf-System.
• eNOS-abgeleitetes NO induziert die Entspannung der glatten Gefäßmuskulatur über einen cGMP-vermittelten Signaltransduktionsweg und spielt eine kritische Rolle bei der Regulation des Blutdrucks. Verwandte Referenzen: PMID:1378832
• Das von eNOS erzeugte NO vermittelt auch die VEGF-induzierte Angiogenese in Herzkranzgefäßen und fördert die Plättchenaktivierung, was zur Hämostase beiträgt.
• Eine alternativ gespleißte Isoform von eNOS lacks katalytische Aktivität und kann als dominanter negativer Regulator fungieren, indem sie Heterodimere mit dem aktiven vollständigen Enzym bildet.
• eNOS lokalisiert sich in der Zellmembran, den Caveolen, dem Zytoplasma, dem Zytoskelett und dem Golgi-Apparat; die Membranzielsteuerung wird durch N-terminale Myristoylierung und Palmitoylierung erleichtert.
• Die Expression wurde in Blutplättchen, Plazenta, Leber und Niere nachgewiesen.
• eNOS ist ein Phosphoprotein, dessen Aktivität durch Phosphorylierung, Kalzium/Calmodulin-Bindung und Kofaktoren wie FAD, FMN, Häm, Eisen, Zink und NADP moduliert wird.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Führen Sie beim Western Blot Phosphatase-Inhibitoren im Lysepuffer ein, um Phosphorylierungssignale zu erhalten, und optimieren Sie die Blockier- und Waschbedingungen für phosphospezifische Antikörper.
• Zum Nachweis der eNOS-Phosphorylierung an Ser1177 kann die Stimulation von Endothelzellen mit VEGF oder die Exposition gegenüber Scherstress eingesetzt werden; die Reaktion sollte jedoch im entsprechenden Probenystem validiert werden.
• Stellen Sie im ELISA sicher, dass das Beschichtungsantigen oder der Fangantikörper angemessen ausgewählt ist, und führen Sie eine Titerbestimmung durch, um die optimalen Arbeitskonzentrationen zu ermitteln.
• Da eNOS Homologie mit anderen NOS-Isoformen aufweist, sollte die Kreuzreaktivität bewertet werden, wenn das System in Systemen mit gemischter Isoformexpression verwendet wird.

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