Phospho-eIF4EBP1-T45 Kaninchen-pAk für Western Blot - Q13541

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: eIF4EBP1-Funktion und -Lokalisierung

• Der eukaryotische Translationsinitiationsfaktor 4E-bindendes Protein 1 (eIF4EBP1, auch bekannt als PHAS-I) ist ein Schlüsselrepressor der cap-abhängigen Translationsinitiation. Er gehört zur Familie der eIF4E-bindenden Proteine und konkurriert mit eIF4G um die Bindung an eIF4E, wodurch die Assembly des eIF4F-Komplexes verhindert wird.
• Die Repressoraktivität von eIF4EBP1 wird durch seinen Phosphorylierungsstatus reguliert: Hypophosphoryliertes eIF4EBP1 bindet stark an eIF4E und hemmt die Translation, während Hyperphosphorylierung (z. B. bei Thr45 und anderen Stellen) es von eIF4E löst, was die Bildung von eIF4F und den Translationsbeginn ermöglicht.
• eIF4EBP1 vermittelt die Regulation der Proteinsynthese stromabwärts verschiedener Reize, einschließlich Hormonen, Wachstumsfaktoren und Nährstoffen, über die MAP-Kinase- und mTORC1-Signalwege. Die Phosphorylierung bei Thr45 ist ein kritisches frühes Ereignis in der sequenziellen Multi-Stellen-Phosphorylierungskaskade.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist vorwiegend zytoplasmatisch, aber eIF4EBP1 kann auch in den Kern shuttle, wo es zusätzliche regulatorische Rollen haben kann.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Ubiquitinierung (Isopeptidbindungsbildung) und extensive Phosphorylierung an mehreren Resten. Das berechnete Molekulargewicht des unmodifizierten Proteins beträgt ca. 12,5 kDa, wobei die Wanderung im SDS-PAGE oft bei 13–15 kDa beobachtet wird, abhängig vom Phosphorylierungszustand.
• eIF4EBP1 ist weit verbreitet exprimiert und spielt eine zentrale Rolle bei der Kontrolle von Zellwachstum, Proliferation und Überleben. Eine Dysregulation seiner Phosphorylierung ist mit Krebs und Stoffwechselerkrankungen verbunden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen ist ein synthetisches Phospho-Peptid, das Thr45 überbrückt, was darauf hindeutet, dass dieser Antikörper speziell dafür entwickelt wurde, die phosphorylierte Thr45-Form von eIF4EBP1 zu erkennen. Eine Kreuzreaktivität mit unphosphoryliertem eIF4EBP1 oder anderen Familienmitgliedern ist unwahrscheinlich, sollte aber in relevanten Modellsystemen bewertet werden.
• Für den Western Blot stellen Sie sicher, dass Proteinlysate in Gegenwart von Phosphatase-Inhibitoren hergestellt werden, um den Phosphorylierungszustand zu erhalten. Eine Bande bei ca. 13–15 kDa wird für humanes eIF4EBP1 erwartet; das scheinbare Molekulargewicht kann je nach Gesamtphosphorylierungslevel leicht variieren.
• Fügen Sie geeignete Kontrollen hinzu, um die Antikörperspezifität zu validieren, wie z. B. unbehandelte gegenüber phosphatasebehandelten Lysaten oder Lysate aus Zellen mit modulierter mTORC1-Aktivität (z. B. Serumhungern/Insulinstimulation).
• Die Leistung des Antikörpers in anderen Anwendungen (z. B. IHC, IF, IP) wurde nicht beschrieben; vorläufige Tests werden empfohlen, wenn er außerhalb von WB verwendet wird.

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