Phospho-eIF4EBP1-T37/T46 Kaninchen-mAk für WB und ELISA - Q13541

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: eIF4EBP1-Funktion und Lokalisation

• eIF4EBP1 (Eukaryotischer Translationsinitiationsfaktor 4E-bindendes Protein 1), auch bekannt als PHAS-I, ist ein zentraler Repressor der Translationsinitiation.
• Es reguliert die EIF4E-Aktivität, indem es mit EIF4G1/EIF4G3 um die Bindung an EIF4E konkurriert. In seinem hypophosphorylierten Zustand bindet es fest an EIF4E und hemmt die cap-abhängige Translation. Hyperphosphorylierung als Reaktion auf Wachstumssignale führt zur Dissoziation von EIF4E, was die Assemblierung des eIF4F-Komplexes und die Translationsinitiation ermöglicht.
• Fungiert als Downstream-Effektor der mTORC1- und MAP-Kinase-Signalwege und vermittelt die Proteinsynthese als Reaktion auf Hormone, Wachstumsfaktoren und Nährstoffe.
• Lokalisiert sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern, was zu seiner Rolle bei der Modulation der Translation und möglicherweise nukleärer Funktionen passt.
• Unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung (z. B. an T37, T46, T70, S65), Acetylierung und Ubiquitinierung (notiert als Isopeptidbindung und Ubl-Konjugation), die gemeinsam seine Aktivität und Stabilität regulieren.
• Molekulargewicht etwa 13 kDa (12580 Da) laut Sequenz, die Wanderung in der SDS-PAGE kann jedoch aufgrund des Phosphorylierungszustands variieren.
• Klassifiziert als Proteinsynthesehemmer, Phosphoprotein und gehört zur Familie der Translationsregulatoren; wurde auch in Proteomik-Studien als Komponente des Referenzproteoms identifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Dieser Antikörper erkennt endogene Mengen von eIF4EBP1 nur, wenn es an Thr37 und Thr46 phosphoryliert ist.
• Für Western Blot: Phosphataseinhibitoren in den Lysepuffer geben, um Phosphorylierungssignale zu erhalten. Die Hauptbande wandert typischerweise bei etwa 13-20 kDa; mehrere Banden können aufgrund unterschiedlicher Phosphorylierung auftreten.
• Validieren Sie das phospho-spezifische Signal durch Behandlung von Zellen mit Stimuli (z. B. Insulin, Serum) zur Induktion der Phosphorylierung und optional durch Phosphatasebehandlung oder Wettbewerb mit nicht-phosphoryliertem Peptid.
• Für ELISA: Beschichtungsbedingungen und Antikörperkonzentration optimieren; erwägen Sie die Paarung mit einem Gesamt-eIF4EBP1-Antikörper zur Normalisierung.
• Kreuzreaktivität wurde in humanen und Rattenproben nachgewiesen; für die Maus ist die Reaktivität trotz Sequenzhomologie nicht in den Kreuzreaktivitätsdaten aufgeführt; eine Validierung in Mausproben kann erforderlich sein.

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