Phospho-eIF4EBP1 (S65) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q13541

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (eukaryotischer Translationsinitiationsfaktor 4E-bindendes Protein 1), auch bekannt als PHAS-I, fungiert als Schlüsselrepressor der cap-abhängigen Translationsinitiation durch Bindung an den eukaryotischen Initiationsfaktor 4E (eIF4E).
• In seinem hypophosphorylierten Zustand konkurriert eIF4EBP1 mit eIF4G (eIF4G1 und eIF4G3) um die Bindung an eIF4E, wodurch die Assembly des eIF4F-Komplexes verhindert und die Translationsinitiation gehemmt wird.
• Hyperphosphorylierung von eIF4EBP1, oft vermittelt durch den mTORC1-Signalweg, induziert dessen Dissoziation von eIF4E, ermöglicht die Bildung des eIF4F-Komplexes und die Translationsaktivierung.
• eIF4EBP1 integriert Signale von Hormonen, Wachstumsfaktoren und Nährstoffen über die MAP-Kinase- und mTOR-Signalwege, um die Proteinsynthese und das Zellwachstum zu steuern.
• Es ist ein Phosphoprotein mit mehreren Phosphorylierungsstellen, einschließlich Ser65, die seine Affinität zu eIF4E und seine Fähigkeit zur Regulation der Translation modulieren.
• Subzellulär lokalisiert sich eIF4EBP1 sowohl im Zytoplasma als auch im Kern, was seinen Rollen bei der Translationskontrolle und möglicherweise beim nukleo-zytoplasmatischen Shuttling entspricht.
• Das Protein wird posttranslational durch Acetylierung und ubiquitin-ähnliche Konjugation (Ubl) zusätzlich zur Phosphorylierung modifiziert, was auf komplexe Regulationsmechanismen hinweist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da dieser Antikörper eine spezifische Phosphorylierungsstelle (Ser65) anzielt, bestätigen Sie die Spezifität des Nachweises, indem Sie Zelllysate mit Lambda-Phosphatase behandeln oder Signale von Wildtyp im Vergleich zu phosphodefizienten Mutanten vergleichen.
• Für Western Blot verwenden Sie Standardverfahren, stellen Sie jedoch sicher, dass Lysepuffer Phosphatase-Inhibitoren enthalten, um den Phosphorylierungszustand zu erhalten. Ein Blockierungsmittel wie BSA kann helfen, die für phosphospezifische Antikörper typische unspezifische Bindung zu reduzieren.
• Bei ELISA sollten Sie die Beschichtung mit dem Peptid-Immunogen als Positivkontrolle in Betracht ziehen und ein nicht-phosphoryliertes Peptid einschließen, um die Phosphospezifität zu verifizieren.
• Aktivierung von mTORC1 (z. B. durch Insulin oder Serumstimulation) erhöht die Ser65-Phosphorylierung, während Hemmung (z. B. Rapamycin) sie verringert; fügen Sie geeignete stimulierende oder hemmende Kontrollen in Ihre Experimente ein.

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