Phospho-EGFR-Y869 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - P00533

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EGFR-Funktion und -Lokalisation

• EGFR ist eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die an Liganden der EGF-Familie bindet (einschließlich EGF, TGF-alpha, AREG, Epigen, Betacellulin, Epiregulin und HBEGF), was zur Rezeptordimerisierung und Autophosphorylierung führt. Verwandte Referenzen: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960 PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029

• Liganden-aktivierter EGFR löst mehrere intrazelluläre Signalkaskaden aus, einschließlich der RAS-RAF-MEK-ERK-, PI3-Kinase-AKT-, PLCgamma-PKC- und STAT-Module sowie der NF-kappa-B-Signalgebung. Verwandte Referenzen: PMID:27153536 PMID:11116146

• EGFR phosphoryliert direkt andere Proteine wie RGS16 (Erhöhung seiner GTPase-Aktivität) und MUC1 (Förderung seiner Interaktion mit SRC und beta-Catenin), was mit G-Protein- und Zelladhäsionswegen verbunden ist. Verwandte Referenzen: PMID:11602604 PMID:11483589

• EGFR reguliert die Zellmigration positiv, indem es mit CCDC88A/GIV interagiert, was EGFR an der Zellmembran hält und die Signalgebung aufrechterhält. Verwandte Referenzen: PMID:20462955

• Das EGFR-Gen (auch bekannt als ERBB1, HER1) kodiert für eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die zur ERBB-Familie gehört; eine alternativ gespleißte Isoform (Isoform 2) kann als Antagonist der EGF-Wirkung fungieren und wird in Eierstockkrebsen exprimiert.

• EGFR ist hauptsächlich an der Zellmembran lokalisiert, wird aber auch im endoplasmatischen Retikulum, im Golgi-Apparat, in der Kernmembran, in Endosomen nachgewiesen und kann sezerniert werden.

• EGFR ist ein Phosphoprotein mit wichtigen Tyrosin-Phosphorylierungsstellen (einschließlich Y869), die seine Kinaseaktivität regulieren, und unterliegt Glykosylierung, Ubiquitinierung und anderen posttranslationalen Modifikationen.

• Ubiquitär in humanen Geweben exprimiert; EGFR dient als Wirtszellrezeptor für das Hepatitis-C-Virus (HCV) und erleichtert den Viruseintritt in Hepatozyten.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das den Resten um Y869 des humanen EGFR entspricht. Um die Phospho-Spezifität zu bestätigen, sollten Phosphatase-behandelte Kontrollen eingeschlossen oder mit nicht-phosphoryliertem Peptid kompetiert werden.
• Für Western Blot sollten EGF-stimulierte Zelllysate verwendet werden; es ist eine Bande bei ~134 kDa zu erwarten. Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-EGFR wird berichtet, sollte aber für Ihre Ziel-Spezies validiert werden.
• Für ELISA sollte die Beschichtung mit einem phosphorylierten Peptid in Betracht gezogen und die Blockierungs- und Detektionsbedingungen zur Verbesserung des Signal-Rausch-Verhältnisses optimiert werden.
• Vermeiden Sie harte Stripping-Bedingungen beim erneuten Sondieren von Blots, da dies das phospho-spezifische Signal entfernen kann.

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