Phospho-EGFR-Y1197 Kaninchen-pAk für WB - P00533

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des Epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptors (EGFR)

• EGFR ist ein Rezeptor-Tyrosinkinase, die an Liganden der EGF-Familie bindet und mehrere Signalkaskaden aktiviert, die das Zellwachstum, das Überleben und die Differenzierung steuern. Verwandte Referenzen: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960
• Ligandeninduzierte Dimerisierung führt zur Autophosphorylierung an wichtigen Tyrosinen; die Phosphorylierung bei Y1197 schafft eine Docking-Stelle für GRB2. Verwandte Referenzen: PMID:27153536
• Aktiviertes EGFR löst mindestens vier Hauptwege aus: RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC und STATs. Verwandte Referenzen: PMID:27153536
• EGFR phosphoryliert direkt Substrate wie RGS16 und MUC1 und moduliert so die G-Protein-Signalgebung und die Zelladhäsion. Verwandte Referenzen: PMID:11602604 PMID:11483589
• Die Wechselwirkung mit CCDC88A/GIV fördert den anhaltenden Membranverbleib und die Zellmigration. Verwandte Referenzen: PMID:20462955
• Eine alternative Isoform (Isoform 2) kann als Antagonist der EGF-Signalgebung wirken.
• EGFR befindet sich vorwiegend an der Plasmamembran, gelangt aber auch zu Endosomen, Golgi-Apparat, endoplasmatischem Retikulum und Zellkern; eine sezernierte Form existiert. Ubiquitär exprimiert, wobei Isoform 2 auch bei Eierstockkrebs vorkommt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Verwenden Sie für Western Blots Phosphatase-Inhibitor-Cocktails während der Zelllyse, um die Phosphorylierung bei Y1197 zu erhalten.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität durch einen Vergleich von unbehandelten mit EGF-stimulierten Zelllysaten; nach der Aktivierung wird eine deutliche Zunahme der Bandenintensität um 134 kDa erwartet.
• Das reife EGFR-Protein hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von ~134 kDa, aber posttranslationale Modifikationen wie Glykosylierungen können eine Mobilitätsverschiebung verursachen; verwenden Sie geeignete Molekulargewichtsmarker und Positivkontrollen.
• Als allgemeiner Ausgangspunkt für phosphospezifische polyklonale Antikörper sollten Sie Verdünnungen zwischen 1:500 und 1:2000 testen; optimieren Sie dies für Ihre spezifischen experimentellen Bedingungen.

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