Phospho-EGFR (Y1148) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P00533

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: EGFR-Funktion und -Lokalisierung

• EGFR ist ein Rezeptor-Tyrosinkinase, der an Liganden der EGF-Familie bindet (EGF, TGF-alpha, AREG, Epigen, Betacellulin, Epiregulin, HB-EGF) und die Rezeptordimerisierung sowie Autophosphorylierung an wichtigen Tyrosinresten auslöst, einschließlich Y1148. Verwandte Referenzen: PMID:10805725, PMID:27153536
• Autophosphoryliertes EGFR dient als Andockstelle für Adapterproteine wie GRB2 und aktiviert nachgeschaltete Signalkaskaden: RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC und STAT-Module. Es aktiviert auch NF-kappa-B und phosphoryliert direkt RGS16 und MUC1 und koppelt so an G-Protein- und Beta-Catenin-Signalwege. Verwandte Referenzen: PMID:27153536, PMID:11116146, PMID:11602604, PMID:11483589
• EGFR reguliert die Zellmigration positiv durch Interaktion mit CCDC88A/GIV und trägt zu Lernen, Gedächtnis und Schmerzsignalisierung bei. Verwandte Referenzen: PMID:20462955
• Isoform 2 kann als Antagonist der EGF-Wirkung fungieren und wird auch in Eierstockkrebsen exprimiert; insgesamt ist EGFR ubiquitär exprimiert.
• Subzellulär befindet sich EGFR in der Zellmembran, dem ER, dem Golgi-Apparat, dem Zellkern, Endosomen und wird sezerniert.
• Bei viralen Infektionen wirkt EGFR als Rezeptor für das Hepatitis-C-Virus (HCV) und vermittelt den Eintritt durch Förderung der CD81-CLDN1-Komplexbildung.
• Schlüsselwörter: Rezeptor, Tyrosin-Proteinkinase, Proto-Onkogen, Phosphoprotein, Glykoprotein; kritisch für die Signaltransduktion und häufig dysreguliert bei Krebs.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blots verwenden Sie einen für 134 kDa geeigneten Molekulargewichtsmarker und schließen positive Kontrolllysate aus EGF-stimulierten menschlichen Zelllinien ein, um die Phospho-Spezifität zu bestätigen.
• Überprüfen Sie die Phosphorylierungsabhängigkeit, indem Sie die Proben vor dem Immunoblotting mit Lambda-Phosphatase behandeln; ein Signalverlust bestätigt die phospho-spezifische Bindung.
• Für ELISA sollten Sie Beschichtungen mit Phospho-Peptid und Nicht-Phospho-Peptid-Kontrollen in Betracht ziehen, um die Kreuzreaktivität zu bewerten; optimieren Sie die Antikörperverdünnung und die Detektionsbedingungen.
• Da dieser Antikörper ein Kaninchen-Polyklonaler ist, wird ein HRP-konjugierter Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper empfohlen; verwenden Sie BSA-Blockierung, um unspezifische Bindungen zu minimieren.

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