Phospho-DNA-PKcs-S2056 Kaninchen-pAb für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P78527

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von DNA-PKcs

• DNA-PKcs (PRKDC) dient als katalytische Untereinheit des DNA-abhängigen Proteinkinase-Komplexes, fungiert als molekularer Sensor für DNA-Schäden und spielt eine zentrale Rolle bei der Reparatur von Doppelstrangbrüchen durch nicht-homologe Endverbindung (NHEJ) und V(D)J-Rekombination. Verwandte Referenzen: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805
• Es lokalisiert an Chromosomenenden und trägt zur Aufrechterhaltung der telomeren Stabilität sowie zur Verhinderung der Chromosomenendfusion bei.
• Neben der DNA-Reparatur moduliert DNA-PKcs die Transkription, fördert die Ribosomenbiogenese durch Verarbeitung der prä-rRNA und reguliert die angeborenen Immunantworten über den cGAS-STING-Weg. Verwandte Referenzen: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805 PMID:32103174 PMID:28712728 PMID:33273464 PMID:35460603
• Es phosphoryliert Ser-139 des Histons H2AX, ein Schlüsselereignis in der DNA-Schadensantwort, sowie zahlreiche andere Substrate einschließlich p53, AKT, XRCC4 und WRN, wodurch es Apoptose und Zellsignalierung beeinflusst. Verwandte Referenzen: PMID:14627815 PMID:16046194 PMID:10026262 PMID:10467406 PMID:11889123 PMID:15262962
• Vorwiegend ein Kernprotein, DNA-PKcs findet sich auch im Nukleolus und Zytosol, was seine vielfältigen funktionellen Rollen widerspiegelt.
• Unterliegt Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung; Mutationen in PRKDC sind mit schwerer kombinierter Immundefizienz (SCID) assoziiert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das den Bereich Ser2056 des menschlichen DNA-PKcs abdeckt und so die Spezifität für den Phosphorylierungszustand gewährleistet. Fügen Sie bei der Validierung geeignete phospho-negative Kontrollen hinzu.
• Für Western Blots sollten aufgrund des sehr hohen Molekulargewichts von DNA-PKcs (469 kDa) Gele mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 4–8 %) und verlängerte Transferzeiten in Betracht gezogen werden. Verwenden Sie vorgefärbte Marker mit hohem Molekulargewicht für eine klare Visualisierung.
• Bei Immunfluoreszenz oder Immunhistochemie ist mit einer starken Kernfärbung sowie möglichen nukleolären und zytoplasmatischen Signalen zu rechnen. Optimieren Sie die Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle, um das Phospho-Epitop zu erhalten.
• Eine Kreuzreaktivität wird für den Menschen berichtet; wenn andere Spezies getestet werden, bestätigen Sie die Sequenzhomologie um Ser2056 und führen Sie einen Pilotversuch durch.

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