Phospho-Cyclin E1-T395 Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P24864

Kernspezifikationen und Parameter des Produkts

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Cyclin E1

• Cyclin E1 ist ein G1/S-spezifisches Cyclin, das für die Kontrolle des Zellzyklus am G1/S-Übergang essenziell ist. Es bildet einen Komplex mit der Cyclin-abhängigen Kinase 2 (CDK2) und aktiviert diese, wodurch der Übergang von der G1- in die S-Phase vorangetrieben wird.
• Es gehört zur Cyclin-Familie, einer Gruppe regulatorischer Proteine, deren Konzentration während des Zellzyklus schwankt und die wichtige Checkpoints steuert.
• Das Protein lokalisiert sich überwiegend im Zellkern, was mit seiner Rolle bei der Regulation der Transkription und der Zellzyklusmaschinerie übereinstimmt.
• Die Gewebeexpression ist in Hoden und Plazenta am höchsten, mit niedrigen Spiegeln in bronchialen Epithelzellen, was seine Funktion in proliferierenden Geweben widerspiegelt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen die Phosphorylierung an mehreren Resten (wie T395), Ubiquitinierung und potenzielle Sumoylierung, die die Proteinstabilität und -aktivität modulieren.
• Alternatives Spleißen erzeugt Isoformen mit unterschiedlicher Regulation und möglicherweise gewebespezifischen Funktionen.
• Das berechnete Molekulargewicht beträgt etwa 47.077 Da (UniProt), was mit der beobachteten ~47 kDa Bande im Western Blot übereinstimmt.
• UniProt-Annotationen heben die Beteiligung an der Zellteilung, der Regulation Cyclin-abhängiger Kinasen und der proteomischen Identifizierung hervor, was seine Bedeutung für die Proliferation normaler und krebsartiger Zellen unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phospho-Peptid um T395, wodurch dieser Antikörper ideal für den spezifischen Nachweis von an diesem Rest phosphoryliertem Cyclin E1 geeignet ist. Zur Bestätigung der Phospho-Spezifität sollten Proben mit λ-Phosphatase behandelt oder ein nicht-phosphoryliertes Peptid zur Blockierung verwendet werden.
• Im Western Blot wird eine Bande bei etwa 47 kDa erwartet; validieren Sie jedoch das Molekulargewicht in Ihrem spezifischen Probensystem, da posttranslationale Modifikationen die Migration verschieben können.
• Für Immunfluoreszenz/Immunzytochemie ist eine nukleäre Färbung zu erwarten. Verwenden Sie DAPI oder eine andere nukleäre Gegenfärbung, um die Lokalisierung zu verifizieren, und nutzen Sie geeignete Fixierungs-/Permeabilisierungsbedingungen, um Phospho-Epitope zu erhalten.
• Bei der Anwendung im ELISA kann der Antikörper Phospho-Cyclin E1 in Lysaten einfangen oder nachweisen; optimieren Sie die Beschichtungs- und Detektionsschritte für Ihr Assay-Format.
• Kreuzreaktivität wird für Mensch, Maus und Ratte berichtet; bei Verwendung anderer Spezies führen Sie eine Sequenzabgleichung um T395 und eine vorläufige Validierung durch.

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