Phospho-Chk1-S317 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper (WB, ELISA) - O14757

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Chk1

• Serin/Threonin-Proteinkinase Chk1 (CHEK1) ist eine entscheidende Zellzyklus-Checkpoint-Kinase, die die Genomintegrität sicherstellt, indem sie bei DNA-Schäden oder Replikationsstress einen Zellzyklusarrest und DNA-Reparatur vermittelt. Verwandte Referenzen: PMID:11535615, PMID:12399544, PMID:12446774
• Chk1 phosphoryliert CDC25A, CDC25B und CDC25C, was zu ihrer Hemmung durch 14-3-3-Bindung oder proteasomalen Abbau führt. Dadurch wird die Aktivierung von CDK-Cyclin verhindert und der Zellzyklusfortschritt blockiert. Verwandte Referenzen: PMID:12676583, PMID:12676925, PMID:12759351, PMID:9278511, PMID:19734889, PMID:20090422
• Es phosphoryliert direkt RAD51 an Thr-309, um die homologe Rekombinationsreparatur zu fördern, TP53 an mehreren C-terminalen Stellen, um dessen Aktivierung und den Zellzyklusarrest zu verstärken, sowie FANCE, um die DNA-Quervernetzungsreparatur zu erleichtern. Verwandte Referenzen: PMID:15665856, PMID:10673501, PMID:15659650, PMID:16511572, PMID:17296736
• Chk1 phosphoryliert TLK1 an Ser-743, verhindert die ASF1A-Phosphorylierung und verbessert die Chromatinassemblierung. Es reguliert zudem PCNA für die Erhaltung von Replikationsgabeln. Verwandte Referenzen: PMID:12660173, PMID:12955071, PMID:18451105
• Zusätzlich phosphoryliert Chk1 Histon H3.1 (H3T11ph), um Gene epigenetisch zu stummschalten, phosphoryliert RB1 zur Förderung der E2F-Interaktion und targetiert SPRTN sowie PABIR1/FAM122A, um Replikationsstress und den G2/M-Checkpoint zu modulieren. Verwandte Referenzen: PMID:17380128, PMID:31316063, PMID:33108758
• Eine endogene Spleißvariante wirkt als Repressor der vollständigen Chk1 und antagonisiert deren Funktion, um den Übergang von der S- zur G2/M-Phase zu fördern.
• Subzellulär lokalisiert sich Chk1 im Zellkern, auf Chromosomen, im Zytoplasma und an Zentrosomen, wobei es während der Mitose an dem Zentrosom angereichert ist.
• Es wird ubiquitär exprimiert, mit den höchsten Gehalten im Thymus, Hoden, Dünndarm und Dickdarm.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid im Bereich von Ser317; stellen Sie sicher, dass bei der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren hinzugefügt werden, um die endogene Phosphorylierung an dieser Stelle zu erhalten.
• Für Western Blotting ist eine spezifische Bande bei ~54 kDa zu erwarten. Validieren Sie die Spezifität, indem Sie Zelllysate mit Lambda-Phosphatase behandeln oder nicht-phosphospezifische Chk1-Antikörper als Kontrolle verwenden.
• Verwenden Sie im ELISA immobilisierte Peptide oder Zelllysate und erwägen Sie eine Blockierung mit phosphorylierten gegenüber nicht-phosphorylierten Peptiden, um die Phosphospezifität zu bestätigen.
• Optimieren Sie die Antikörperverdünnung für Ihr spezifisches Experimentalsystem; typische Startverdünnungen für WB betragen 1:500–1:2000, dennoch wird eine empirische Bestimmung empfohlen.
• Die Kreuzreaktivität wurde für humane Proben bestätigt; für andere Spezies überprüfen Sie die Sequenzhomologie im Bereich von Ser317 und führen Sie einen experimentellen Test durch.

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