Phospho-CDK1-Y15 Kaninchen-mAb für WB, ELISA - P06493

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CDK1-Funktion und -Lokalisierung

• Cyclin-abhängige Kinase 1 (CDK1), auch bekannt als CDC2 oder p34-Proteinkinase, ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die eine zentrale Rolle im eukaryotischen Zellzyklus spielt, indem sie den G2-M-Übergang und den Mitosebeginn fördert (PubMed:16407259, PubMed:16933150, PubMed:17459720). Verwandte Referenzen: PMID:16407259 PMID:16933150 PMID:17459720
• Sie phosphoryliert eine Vielzahl von Substraten – einschließlich Lamine, Histon H1, Tau und Vimentin –, um die Trennung der Zentrosomen, den Zerfall der Kernhülle und die Kondensation der Chromosomen zu orchestrieren (PubMed:16407259, PubMed:16933150, PubMed:17459720, PubMed:18480403, PubMed:20360007, PubMed:2188730). Verwandte Referenzen: PMID:16407259 PMID:16933150 PMID:17459720 PMID:18480403 PMID:20360007 PMID:2188730
• Die CDK1-Aktivität wird streng durch Phosphorylierung/Dephosphorylierung an Thr14 und Tyr15 reguliert. Die durch WEE1 und PKMYT1 vermittelte Phosphorylierung an Tyr15 hemmt CDK1, während CDC25-Phosphatasen dieses hemmende Phosphat entfernen, um den Eintritt in die Mitose voranzutreiben (PubMed:18480403, PubMed:20360007, PubMed:2188730, PubMed:20395957). Verwandte Referenzen: PMID:18480403 PMID:20360007 PMID:2188730 PMID:20395957
• Als Reaktion auf DNA-Schäden wird CDK1 an Tyr15 phosphoryliert und gehemmt, was zu einem G2-Arrest für die DNA-Reparatur führt; die Phosphatase WIP1 reaktiviert CDK1, nachdem die Reparatur abgeschlossen ist (PubMed:20360007, PubMed:20395957). Verwandte Referenzen: PMID:20360007 PMID:20395957
• CDK1 lokalisiert im Kern, Zytoplasma, Mitochondrien, Zentrosom und Spindel, was seine vielfältigen mitotischen Rollen widerspiegelt.
• Kommt in erhöhten Konzentrationen in Brustkrebsgeweben vor, was es zu einem potenziellen diagnostischen und therapeutischen Ziel macht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das Tyr15 von humanem CDK1 umfasst; daher erkennt der Antikörper spezifisch die phosphorylierte Form.
• Für Western Blotting ist ein Band bei ~34 kDa zu erwarten. Verwenden Sie Phosphatase-Inhibitoren im Lysepuffer, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Die Spezifität kann durch Behandlung von Proben mit Lambda-Phosphatase oder durch Durchführung von Peptid-Wettbewerbsassays mit dem phosphorylierten und nicht-phosphorylierten Peptid überprüft werden.
• Dieser Antikörper ist für menschliche Proben validiert; die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies wurde nicht bestimmt.
• Für ELISA kann erwogen werden, das Phosphopeptid als Fangantigen und einen Gesamt-CDK1-Antikörper zur Detektion für die Normalisierung zu verwenden.

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