Phospho-CDK1-T161 Kaninchen pAb - P06493

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CDK1

• CDK1 (auch bekannt als CDC2) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die essenziell für den G2-M-Übergang im Zellzyklus ist. Sie phosphoryliert zahlreiche Substrate, um mitotische Ereignisse zu steuern. Verwandte Referenzen: PMID:16407259, PMID:16933150, PMID:17459720
• Seine Aktivierung erfordert die Phosphorylierung an Thr161 durch den CDK-aktivierenden Kinase(CAK)-Komplex, während eine inhibitorische Phosphorylierung an Thr14 und Tyr15 durch WEE1 und PKMYT1 ihn inaktiv hält; die Dephosphorylierung durch CDC25-Phosphatasen löst den Eintritt in die Mitose aus. Verwandte Referenzen: PMID:18480403, PMID:20360007, PMID:2188730, PMID:41100585
• CDK1 phosphoryliert Kernlamine (LMNA, LMNB1, LMNB2), was den Zusammenbruch der Kernhülle während der Mitose verursacht. Verwandte Referenzen: PMID:2188730, PMID:2344612, PMID:37788673
• Nach einem DNA-Schaden wird CDK1 über PKR/WEE1 inaktiviert, um einen G2-Arrest zu erzwingen, und nach der Reparatur über WIP1/CDC25-Signalgebung reaktiviert. Verwandte Referenzen: PMID:20360007, PMID:20395957
• CDK1 ist in mehreren subzellulären Kompartimenten lokalisiert, darunter Kern, Zytoplasma, Mitochondrium, Zentrosom und mitotische Spindel, was die Koordination verschiedener mitotischer Prozesse ermöglicht.
• CDK1 beteiligt sich an der Regulation der zirkadianen Uhr durch Phosphorylierung von NR1D1, wodurch es für den Abbau markiert wird; es wirkt auch als Rezeptor für den Eintritt des Hepatitis-C-Virus in Hepatozyten. Verwandte Referenzen: PMID:27238018

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da dieser Antikörper eine Phosphorylierungsstelle (Thr161) targeting, sollte der Phosphorylierungsstatus während der Probenvorbereitung durch Zugabe von Phosphataseinhibitoren erhalten bleiben und Erhitzen in phosphatfreien Puffern vermieden werden.
• Für Western Blot ist eine Bande bei etwa 34 kDa zu erwarten; verwenden Sie als Positivkontrolle mitotische Zelllysate (z. B. an der G2/M-Phase arrestierte Zellen) und als Negativkontrolle eine Behandlung mit Lambda-Phosphatase.
• Bei der Immunpräzipitation kann die Leistung des Antikörpers von der Häufigkeit des Phospho-Epitops abhängen; anreichern Sie mitotische Zellen, um die Detektion zu verbessern.
• Bei Immunfluoreszenz und IHC kann eine Standard-Antigenreparatur zusammen mit schneller Fixierung das Phosphorylierungssignal erhalten; es wird empfohlen, Pilottest zur Optimierung der Detektion durchzuführen.
• Obwohl für ELISA aufgeführt, kann eine Beschichtung des direkten Antigens mit dem Phosphopeptid erforderlich sein; es kann ein kompetitives ELISA entwickelt werden, um Phosphorylierungsniveaus zu quantifizieren.

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