Phospho-BRD4-T249 Kaninchen-pAb für WB - O60885

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: BRD4-Funktion und -Lokalisierung

• BRD4 (Bromodomain-containing protein 4, auch bekannt als HUNK1) ist ein Chromatin-Leser, der acetylierte Histone erkennt und bindet und eine Schlüsselrolle bei der Übertragung des epigenetischen Gedächtnisses über Zellteilungen hinweg und bei der Transkriptionsregulation spielt. Verwandte Referenzen: PMID:20871596 PMID:23086925 PMID:23317504
• Es bleibt während des gesamten Zellzyklus mit acetyliertem Chromatin assoziiert, erhält den acetylierten Chromatinstatus und aufrechterhalten die höheren Chromatinstrukturen für die postmitotische G1-Gen-Transkription. Verwandte Referenzen: PMID:22334664 PMID:23317504 PMID:23589332
• Während der Interphase reguliert BRD4 die Transkription signalinduzierbarer Gene durch Rekrutierung des P-TEFb-Komplexes an Promotoren und distale Enhancer, was die Phosphorylierung der CTD von RNA-Polymerase II und die produktive Elongation erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:16109376 PMID:16109377 PMID:19596240
• BRD4 bindet acetyliertes RELA, um die NF-kappa-B-Signalisierung zu aktivieren, und wird nach CK2-Phosphorylierung an p53/TP53-Ziel-Promotoren rekrutiert, um die p53-vermittelte Transkription zu regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:19103749 PMID:23317504
• Im DNA-Schadensantwort wirkt BRD4 als Chromatin-Isolator, indem es den Condensin-2-Komplex an acetylierte Histone rekrutiert und die Ausbreitung der Phosphorylierung von Histon H2AX begrenzt.
• Ubiquitär exprimiert und lokalisiert im Kern und im Chromatin.
• Post-translational durch Acetylierung und Phosphorylierung modifiziert; enthält zwei Bromodomänen; beteiligt an chromosomalen Umstellungen, die mit Krebs in Verbindung stehen; interagiert mit viralen Proteinen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um Thr249 von humanem BRD4. Um die Phosphorylierungsspezifität zu bestätigen, sollten Sie in Parallelversuchen einen nicht-phosphospezifischen BRD4-Antikörper als Kontrolle verwenden.
• Für Western Blotting (WB) wird eine Bande von ca. 152 kDa erwartet. Verwenden Sie einen geeigneten Gel-Prozentsatz (z. B. 8 % Polyacrylamid) und optimieren Sie die Transferbedingungen für hochmolekulare Proteine.
• Validieren Sie den Antikörper in einer relevanten Zelllinie (z. B. HeLa, Jurkat) mit bekanntem BRD4-Phosphorylierungsstatus. Fügen Sie Phosphatase-Inhibitor-Cocktails den Lysespuffern hinzu, um die Phosphorylierungssignale zu erhalten.
• Da eine Kreuzreaktivität für Maus und Ratte berichtet wird, eignet sich dieser Antikörper möglicherweise für Nagetiermodellstudien; Fügen Sie zur Verifizierung geeignete spezies-spezifische Positivkontrollen hinzu.

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