Phospho-BRD4-T204 Kaninchen-mAk für WB, ELISA - O60885

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: BRD4-Funktion und Lokalisierung

• BRD4 (Bromodomänen-haltiges Protein 4, auch bekannt als HUNK1) ist ein Chromatin-Reader-Protein, das acetylierte Histone erkennt und bindet und eine Schlüsselrolle im epigenetischen Gedächtnis und der Transkriptionsregulation spielt. Verwandte Referenzen: PMID:20871596, PMID:23086925, PMID:23317504
• Es bleibt während des gesamten Zellzyklus mit acetyliertem Chromatin assoziiert und sorgt so für ein epigenetisches Gedächtnis für die Genexpression in der postmitotischen G1-Phase, indem es die Chromatinstruktur bewahrt. Verwandte Referenzen: PMID:22334664, PMID:23317504, PMID:23589332
• Während der Interphase reguliert BRD4 die Transkription signalinduzierbarer Gene, indem es den P-TEFb-Komplex an Promotoren und distale Enhancer rekrutiert, oft in Zusammenarbeit mit JMJD6, und negative Regulatoren wie HEXIM1 und 7SKsnRNA verdrängt. Verwandte Referenzen: PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19596240
• BRD4 bindet auch acetyliertes RELA und aktiviert den NF-kappa-B-Signalweg durch Rekrutierung von P-TEFb. Verwandte Referenzen: PMID:19103749
• Nach Phosphorylierung durch CK2 wird BRD4 an p53/TP53-Zielpromotoren rekrutiert und reguliert so die p53-vermittelte Transkription. Verwandte Referenzen: PMID:23317504
• Bei der DNA-Schadensantwort wirkt BRD4 als Chromatin-Isolator, indem es den Condensin-2-Komplex rekrutiert, wodurch die DNA-Schadenssignalgebung gehemmt und die Ausbreitung der H2AX-Phosphorylierung begrenzt wird.
• Ubiquitär exprimiert, lokalisiert BRD4 im Zellkern und an Chromosomen und unterliegt verschiedenen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot (WB) verwenden Sie ein Standard-SDS-PAGE-Protokoll mit 8%igen oder Gradientengelen, um das ~152 kDa große BRD4-Protein effektiv aufzutrennen. Schließen Sie Phosphataseinhibitoren in die Lysepuffer ein, um die Phosphorylierung an T204 zu erhalten.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität durch Testung mit nicht-phosphoryliertem Peptid als Kompetitor oder durch Phosphatasebehandlung.
• Für ELISA: Ziehen Sie die Verwendung von phosphorylierten und nicht-phosphorylierten Peptiden zur Beurteilung der Spezifität in Betracht; optimieren Sie die Beschichtungskonzentration.

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