Phospho-BRD4 (S492/S494) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, DB, ELISA - O60885

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: BRD4-Funktion und Lokalisation

• BRD4 ist ein Mitglied der Bromodomäne und extraterminalen (BET) Familie und fungiert als Chromatin-Leser, der an acetylierte Histone bindet, um epigenetisches Gedächtnis über Zellteilungen hinweg zu übertragen. Verwandte Referenzen: PMID:20871596, PMID:23086925, PMID:23317504
• Es bleibt während des gesamten Zellzyklus mit acetyliertem Chromatin assoziiert und erhält die Chromatin-Hochordnungsstruktur für die postmitotische G1-Gentranskription aufrecht. Verwandte Referenzen: PMID:22334664, PMID:23317504, PMID:23589332
• BRD4 rekrutiert den P-TEFb-Komplex zu Genpromotoren und distalen Enhancern, was zur Phosphorylierung der RNA-Polymerase II-CTD und zur Aktivierung der signalinduzierbaren Transkription führt. Verwandte Referenzen: PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19596240
• Es rekrutiert P-TEFb auch an acetyliertes RELA und verknüpft so BRD4 mit der Aktivierung des NF-kappa-B-Signalwegs. Verwandte Referenzen: PMID:19103749
• Die Phosphorylierung an Resten wie S492 und S494 durch CK2 erleichtert die Interaktion von BRD4 mit p53/TP53-gerichteten Promotoren. Verwandte Referenzen: PMID:23317504
• In der DNA-Schadensantwort wirkt BRD4 als Chromatin-Isolator, indem es Condensin-2 an acetylierte Histone rekrutiert und so die Ausbreitung der H2A.X-Phosphorylierung begrenzt.
• BRD4 lokalisiert im Zellkern und an Chromosomen; es wird ubiquitär exprimiert und unterliegt alternativem Spleißen sowie posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung.
• Zusätzlich reguliert BRD4 die Differenzierung von CD4+ T-Zellen in Th17-Zellen (By similarity).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot: Lysate mit Phosphataseinhibitoren zubereiten, um die Phosphorylierung zu erhalten, und ein SDS-PAGE-Gel mit niedrigem Prozentsatz (z.B. 6–8%) für eine optimale Trennung des ~152 kDa BRD4-Proteins verwenden.
• Dot-Blot- und ELISA-Assays können von einer Blockierung mit phospho-freiem BSA profitieren, um den Hintergrund zu reduzieren; die Spezifität mittels Konkurrenz mit nicht-phosphoryliertem Peptid bestätigen.
• Die Reaktivität des Antikörpers in humanen Proben legt seine Verwendung mit humanen Zelllinien nahe; Kreuzreaktivität im eigenen Zielsystem bei Bedarf validieren.
• Passende positive Kontrollen in Betracht ziehen, wie z.B. Lysate von Zellen, die mit Phosphataseinhibitoren oder bekannten Phosphorylierungsinduktoren behandelt wurden.

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