Phospho-Bad-S112 Kaninchen mAb für WB, IHC-P, ELISA - Q92934

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Bad (Bcl2-assoziierter Agonist des Zelltods)

• Bad (Bcl2-assoziierter Agonist des Zelltods, auch bekannt als Bcl-2-bindende Komponente 6, Bcl-2-ähnliches Protein 8) ist ein proapoptotisches Mitglied der Bcl-2-Familie, das den Zelltod fördert, indem es um die Bindung an die antiapoptotischen Proteine Bcl-X(L), Bcl-2 und Bcl-W konkurriert.
• Diese Konkurrenz stört die Heterodimerisierung von Bcl-X(L) mit BAX, wodurch die todunterdrückende Aktivität von Bcl-X(L) umgekehrt wird – allerdings nicht die von Bcl-2 – und verbindet Wachstumsfaktor-Rezeptor-Signalisierung mit Apoptose (gemäß Ähnlichkeit).
• Das BAD-Gen (Gen-ID: 572) codiert ein einzelnes Proteinprodukt mit einem Molekulargewicht von etwa 18 kDa, was durch UniProt bestätigt wird (Q92934, 18392 Da).
• Bad ist an der äußeren Mitochondrienmembran und im Zytoplasma lokalisiert, wo es Überlebens- und Todessignale integriert; seine Aktivität wird streng durch posttranslationale Modifikationen reguliert.
• Mehrere wichtige posttranslationale Modifikationen wurden an Bad identifiziert, darunter Phosphorylierung, Acetylierung und Methylierung, die seine proapoptotische Funktion und subzelluläre Lokalisation modulieren.
• Phosphorylierung an Ser-112 (und umgebenden Stellen) inaktiviert Bad, indem es die Bindung an 14-3-3-Proteine fördert und es im Zytoplasma sequestriert, wodurch die mitochondriale Translokation und Apoptose verhindert werden.
• Bad wird in einer Vielzahl von Geweben exprimiert, was mit seiner grundlegenden Rolle bei der Regulation des programmierten Zelltods in verschiedenen Zelltypen übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Da das Immunogen ein synthetisches Phosphopeptid ist, das S112 des humanen Bad umfasst, wird erwartet, dass dieser Antikörper spezifisch die Ser-112-phosphorylierte Form erkennt; es wird empfohlen, die Phosphospezifität mit Phosphatase-behandelten Lysaten oder einem nicht-phosphospezifischen Bad-Antikörper als Kontrolle zu überprüfen.
• Für die Western Blot (WB)-Analyse beträgt das vorausgesagte Molekulargewicht von Bad 18 kDa; unter optimalen Bedingungen sollte eine einzelne Bande bei etwa dieser Größe nachgewiesen werden, wobei Nutzer das Signal im relevanten Probensystem und experimentellen Arbeitsablauf validieren sollten.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) sollten Antigen-Retrieval- und Blockierungsbedingungen empirisch optimiert werden; die erwartete Lokalisation ist mitochondrial und zytoplasmatisch, sodass Färbemuster entsprechend ausgewertet werden sollten.
• In ELISA-Anwendungen kann dieser Antikörper zur Capture oder Detektion von phosphoryliertem Bad in Zell- oder Gewebslysaten verwendet werden; es wird empfohlen, die Assay-Bedingungen mit geeigneten Positiv- und Negativkontrollen zu validieren.
• Aufgrund der Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-Bad ist dieser Antikörper für Studien an diesen gängigen Modellorganismen geeignet; Nutzer sollten jedoch bestätigen, dass die Sequenz um S112 in diesen Arten konserviert ist.

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