Phospho-B-Raf (S445) Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P15056

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: B-Raf-Funktion und Lokalisierung

• Serin/Threonin-Proteinkinase, die mitogene Signale von der Zellmembran zum Zellkern überträgt, indem sie MAP2K1 phosphoryliert und aktiviert und so den MAP-Kinase-Signaltransduktionsweg auslöst (PubMed:21441910, PubMed:29433126). Verwandte Referenzen: PMID:21441910, PMID:29433126
• Phosphoryliert auch PFKFB2 und verknüpft so Wachstumsfaktorsignale mit der Stoffwechselregulation (PubMed:36402789). Verwandte Referenzen: PMID:36402789
• Könnte eine Rolle bei postsynaptischen Antworten hippocampaler Neuronen spielen, was auf eine Beteiligung an neuronaler Signalübertragung hindeutet (PubMed:1508179). Verwandte Referenzen: PMID:1508179
• Lokalisiert im Zellkern, Zytoplasma und an der Zellmembran, was zu seiner Rolle als Signalrelais passt.
• Primär im Gehirn und Hoden exprimiert, mit geringeren Mengen in anderen Geweben.
• Unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Interaktionen regulieren.
• Ein Proto-Onkogen, das häufig in menschlichen Krebsarten mutiert ist; krankheitsassoziierte Varianten werden mit Kardiomyopathie, Taubheit, ektodermaler Dysplasie und intellektueller Beeinträchtigung in Verbindung gebracht (laut UniProt-Keywords).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein Phosphopeptid hergestellt, das den Regionen um S445 von humanem BRAF entspricht; er erkennt voraussichtlich B‑Raf nur, wenn es an dieser Stelle phosphoryliert ist.
• Für WB und ELISA sollten während der Probenvorbereitung Phosphataseinhibitoren verwendet werden, um den Phosphorylierungsstatus an S445 zu erhalten.
• Beim Einrichten von WB sollte das Signal validiert werden, indem Proben mit Lambda-Phosphatase behandelt oder mit nicht-phosphospezifischen B‑Raf-Antikörpern verglichen werden.
• Optimale Arbeitsverdünnungen für WB und ELISA sollten empirisch bestimmt werden; verwenden Sie positive Kontrollen (z. B. stimulierte Zelllysate, von denen bekannt ist, dass sie den MAPK-Weg aktivieren).
• Die Kreuzreaktivität mit Ratten-B‑Raf wurde bestätigt; für andere Spezies sollte experimentell getestet werden, da Sequenzvergleiche eine Reaktivität nahelegen könnten.

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