Phospho-ATR-T1989 Kaninchen-pAk für WB, IHC-P, ELISA - Q13535

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der Serin/Threonin-Proteinkinase ATR

• ATR ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die auch als Ataxia-telangiectasia- und Rad3-ähnliches Protein oder FRAP-ähnliches Protein 1 bekannt ist. Sie wird vom ATR-Gen (FRP1) kodiert und existiert in mindestens zwei Isoformen, wobei Isoform 2 in der Bauchspeicheldrüse, der Plazenta und der Leber, aber nicht im Herzen, im Hoden und im Eierstock gefunden wird.
• Fungiert als Schlüssel-DNA-Schadenssensor-Kinase, die die Checkpoint-Signalierung bei genotoxischen Stressfaktoren wie ionisierender Strahlung, UV-Licht oder Stillstand der DNA-Replikation aktiviert (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164). Verwandte Referenzen: PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Erkennt die Substrat-Konsensussequenz [ST]-Q und phosphoryliert Downstream-Ziele einschließlich BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 und p53/TP53, wodurch die DNA-Replikation und die Mitose gehemmt, während Reparatur, Rekombination und Apoptose gefördert werden (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061). Verwandte Referenzen: PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Phosphoryliert 'Ser-139' des Histons H2AX an DNA-Schadensstellen und reguliert die DNA-Schadensantwort (PubMed:11673449); auch erforderlich für die Ubiquitinierung von FANCD2. Verwandte Referenzen: PMID:11673449
• Reguliert Zellzyklusübergänge, indem es die CDK1-Aktivität während der S-Phase einschränkt, um einen vorzeitigen Eintritt in die G2-Phase zu verhindern, und ist entscheidend für die Stabilität fragiler Stellen und die ordnungsgemäße Verdopplung der Zentrosomen (PubMed:12526805, PubMed:30139873). Verwandte Referenzen: PMID:12526805 PMID:30139873
• Wirkt als mechanischer Stresssensor an der Kernhülle, wo er sich unter Stress umlagert und CHEK1 phosphoryliert, um einen Checkpoint zu vermitteln (PubMed:25083873). Fördert auch den Riss der Kernhülle nach DNA-Schäden durch Phosphorylierung von LMNA an 'Ser-282' (PubMed:37832547). Verwandte Referenzen: PMID:25083873 PMID:37832547
• Beteiligt an der angeborenen Immunität: ATR lokalisiert zu Mikrokernen, die durch genomische Instabilität entstehen, und phosphoryliert LMNA an 'Ser-395', was zum Riss der Mikrokernhülle und zur Aktivierung des cGAS-STING-Weges führt (PubMed:37788673). Verwandte Referenzen: PMID:37788673
• Die subzelluläre Lokalisation ist überwiegend nukleär und chromosomenassoziiert; auch an der Kernhülle zu finden. Ubiquitär exprimiert mit den höchsten Spiegeln im Hoden. Klassifiziert unter Schlüsselwörtern einschließlich Phosphoprotein, DNA-Schaden, DNA-Reparatur, Kinase und alternatives Spleißen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um T1989, daher sollte dieser Antikörper spezifisch ATR erkennen, das an dieser Stelle phosphoryliert ist. Validieren Sie dies unter Verwendung eines nicht-phosphorylierten Peptids oder mit Phosphatase-behandelten Lysaten als negative Kontrolle.
• Im Western Blot (WB) wird eine Bande um 301 kDa erwartet. Aufgrund des hohen Molekulargewichts sollten die Transferbedingungen optimiert werden (z. B. wenig Methanol, lange Transferzeiten) und eine validierte Ladekontrolle ähnlicher Größe verwendet werden.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) und ELISA sorgen Sie für angemessene Antigen-Retrieval- und Blockierungsschritte; die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ermöglicht die Verwendung in Nagetiermodellen, bestätigen Sie dies jedoch mit entsprechenden Gewebekontrollen.
• Da die ATR-Phosphorylierung durch DNA-Schäden induziert wird, kann die Behandlung von Zellen mit genotoxischen Agenzien (z. B. UV, Hydroxyharnstoff) die Signaldetektion verbessern.

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