Phospho-ASK1-T845 Kaninchen-mAk für WB, DB, ELISA - O35099

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ASK1-Funktion und Lokalisierung

• Mitogen-aktivierte Proteinkinase-Kinase-Kinase 5 (MAP3K5), auch als Apoptose-Signal-regulierende Kinase 1 (ASK-1) oder MEK-Kinase 5 (MEKK5) bezeichnet, ist eine Serin/Threonin-Kinase, die durch das Map3k5-Gen in der Maus kodiert wird.
• Fungiert als Kernkomponente des MAP-Kinase-Signaltransduktionskaskade, die Umweltreize in zelluläre Entscheidungen bezüglich Differenzierung, Überleben und Apoptose übersetzt.
• Spielt eine entscheidende Rolle im mitochondrienabhängigen Apoptoseweg durch Caspase-Aktivierung und reagiert auf verschiedene Stressreize.
• Essentiell für angeborene Immunantworten; vermittelt Signalwege, die durch oxidativen Stress, TNF und LPS ausgelöst werden und zur Aktivierung der MKK4/MKK7–JNK- und MKK3/MKK6–p38 MAPK-Wege führen.
• Lokalisiert hauptsächlich im Zytoplasma und im endoplasmatischen Retikulum.
• Wird in adulten Mausgeweben weit verbreitet exprimiert, einschließlich Herz, Gehirn, Lunge, Leber und Niere.
• Das Protein unterliegt Phosphorylierung, Methylierung und Ubiquitinierung; die Thr845-Phosphorylierung ist ein Schlüsselaktivierungsereignis als Reaktion auf Stress.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phospho-Peptid erzeugt, das Thr845 der Maus-ASK1 umspannt, und bietet so eine hohe Spezifität für die aktivierte Form dieser Kinase.
• Beim Western Blot ist eine deutliche Bande bei etwa 155 kDa zu erwarten; vorgefärbte Molekulargewichtsmarker sollten zur Bestätigung der Bandengröße mitgeführt werden.
• Für einen robusten Nachweis von endogenem Phospho‑ASK1 sollten Zellen mit einem geeigneten Stressor stimuliert werden (z. B. oxidativer Stress oder TNFα) und Phosphatase-Inhibitoren in den Lyse- und Reaktionspuffern enthalten sein.
• Das Produkt eignet sich für Dot‑Blot- und ELISA-Anwendungen; bei Verwendung dieser Formate sollten Blockierungs- und Waschbedingungen optimiert werden, um den Hintergrund zu minimieren.
• Wie bei jedem phosphorylierungsspezifischen Antikörper sollte die Signalspezifität bestätigt werden, indem Proben mit λ‑Phosphatase behandelt werden, um den Verlust der Immunreaktivität zu überprüfen.

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