Phospho-AMPKα1-S496 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q13131

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: AMPKα1-Funktion und -Lokalisierung

• AMPKα1, codiert durch das PRKAA1-Gen, ist die katalytische Alpha-1-Untereinheit des heterotrimeren AMP-aktivierten Proteinkinases (AMPK), einem zentralen zellulären Energiesensor.
• Als Reaktion auf niedrige intrazelluläre ATP-Werte phosphoryliert AMPKα1 Schlüsselenzyme des Stoffwechsels und Transkriptionsfaktoren, um anabole Prozesse (Lipid-, Protein-, Kohlenhydratsynthese) zu hemmen und katabole Wege zu fördern, wodurch das Energiegleichgewicht wiederhergestellt wird. Verwandte Referenzen: PMID:17307971, PMID:17712357, PMID:24563466
• AMPKα1 reguliert den Lipidstoffwechsel direkt durch Phosphorylierung und Inaktivierung der Acetyl-CoA-Carboxylasen (ACACA und ACACB), der HMG-CoA-Reduktase (HMGCR) und der hormonsensitiven Lipase (LIPE) und steuert so die Fettsäure- und Cholesterinsynthese.
• Sie spielt auch eine kritische Rolle im Glukosestoffwechsel durch Phosphorylierung von CRTC2/TORC2 (was zur zytoplasmatischen Sequestrierung führt) und Förderung der GLUT4-Translokation zur Plasmamembran.
• Über den Stoffwechsel hinaus hemmt AMPKα1 das Zellwachstum und die Proliferation durch Inhibierung des mTORC1-Weges über Phosphorylierung von TSC2, RPTOR und WDR24 und aktiviert die Autophagie über Phosphorylierung von ULK1 und WDR45/WIPI4. Verwandte Referenzen: PMID:14651849, PMID:18439900, PMID:20160076, PMID:21205641, PMID:28561066, PMID:36732624, PMID:37079666
• Zur subzellulären Lokalisierung gehören das Zytoplasma, der Zellkern und späte Endosomen, was konsistent mit ihren Rollen in der Stoffwechselregulation, der Gentranskription und der Endosom-Signalgebung ist.
• AMPKα1 ist ein Phosphoprotein, das durch Phosphorylierung an verschiedenen Resten reguliert wird; die Phosphorylierung an Ser496 wurde identifiziert und könnte ihre Kinaseaktivität oder Lokalisierung beeinflussen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Fügen Sie während der Zelllyse und Probenvorbereitung immer Phosphatase-Inhibitoren hinzu, um das Phospho-Epitop zu erhalten.
• Validieren Sie die Spezifität, indem Sie Proben mit Lambda-Proteinphosphatase behandeln oder durch Wettbewerb mit dem immunisierenden Phospho-Peptid; der Verlust des Signals bestätigt die Phospho-Spezifität.
• Für Western Blot ist ein Band bei ca. 64 kDa in humanen oder murinen Zelllinien zu erwarten; die Aktivierung von AMPK durch AICAR, Metformin oder Glukoseentzug kann die Detektion verbessern.
• In ELISA kann in Betracht gezogen werden, diesen Antikörper in Kombination mit einem Pan-AMPKα-Capture-Antikörper zu verwenden, um Phospho-AMPKα1 (S496)-Spiegel zu quantifizieren.

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