Phospho-AKT1S1/PRAS40-T246 Kaninchen pAb für WB, ELISA - Q96B36

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von AKT1S1/PRAS40

• AKT1S1 (auch bekannt als PRAS40, 40 kDa prolinreiches AKT-Substrat) ist ein negativer Regulator des mechanistischen Ziels von Rapamycin-Komplex 1 (mTORC1), einem evolutionär konservierten zentralen Nährstoffsensor, der anabole Reaktionen und die Makromolekülbiosynthese stimuliert, um die Erzeugung zellulärer Biomasse und Zellwachstum zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:17277771 | PMID:17386266 | PMID:17510057
• In Abwesenheit von Insulin und Nährstoffen bindet AKT1S1 an den mTORC1-Komplex und hemmt direkt die mTORC1-Aktivität, indem es die Substratrekrutierungsstelle von MTOR blockiert. Verwandte Referenzen: PMID:29236692
• Als Reaktion auf Insulin und Nährstoffe dissoziiert AKT1S1 von mTORC1 – ein Prozess, der von seinem Phosphorylierungsstatus und der Bindung an 14-3-3-Proteine abhängt. Verwandte Referenzen: PMID:17386266 | PMID:18372248 | PMID:16174443
• Die Phosphorylierung an Thr246 (der Immunogenstelle) fördert die 14-3-3-Bindung und hebt die Hemmung von mTORC1 auf.
• AKT1S1 lokalisiert überwiegend im Zytoplasma und Zytosol.
• Es ist weit verbreitet exprimiert mit den höchsten Gehalten in Leber und Herz; die Expression ist in einigen Krebszelllinien (z. B. A-549, HeLa) im Vergleich zu normalen Zellen (z. B. HEK293) erhöht.
• Kann auch eine Rolle bei der nervenwachstumsfaktorvermittelten Neuroprotektion spielen (nach Ähnlichkeit).
• Es wird als Phosphoprotein klassifiziert mit einem berechneten Molekulargewicht von etwa 27 kDa (UniProt: 27383 Da); es unterliegt alternatives Spleißen.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Dieser Antikörper detektiert spezifisch die phosphorylierte Thr246-Form von AKT1S1; er erkennt das nicht phosphorylierte Protein nicht. Fügen Sie phosphatasebehandelte Lysate als Negativkontrolle hinzu, um das phosphorylierungsabhängige Signal zu bestätigen.
• Für das Western Blotting erwarten Sie eine Bande nahe 27 kDa. Verwenden Sie Phosphataseinhibitoren in Lysepuffern, um die Phosphorylierungszustände zu erhalten.
• Bei ELISA-Anwendungen erwägen Sie die Beschichtung mit dem phosphorierten Peptid-Immunogen und validieren Sie die Spezifität gegenüber dem entsprechenden nicht phosphorylierten Peptid.
• Bei der Erforschung von mTORC1-Signalwegen stimulieren Sie Zellen mit Insulin oder Wachstumsfaktoren, um die AKT1S1-Phosphorylierung zu induzieren und die Dissoziation vom mTORC1-Komplex zu überwachen.
• Validieren Sie den Antikörper in Ihrem experimentellen System; humane Krebszelllinien (z. B. HeLa, A-549) können eine höhere endogene Expression aufweisen, was die Detektion erleichtert.

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