Phospho-AKT1-T450 + AKT2-T451 + AKT3-T447 Rabbit mAb für WB, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der AKT-Familie

• Die AKT-Familie umfasst drei eng verwandte Serin/Threonin-Proteinkinasen: AKT1 (PKB alpha, P31749), AKT2 (PKB beta, P31751) und AKT3 (PKB gamma, Q9Y243), die von den Genen AKT1, AKT2 bzw. AKT3 kodiert werden. Sie weisen eine hohe Sequenzhomologie auf und haben überlappende, aber unterschiedliche biologische Rollen.
• AKT-Kinasen regulieren diverse zelluläre Prozesse, einschließlich Stoffwechsel, Proliferation, Zellüberleben, Wachstum und Angiogenese, durch Phosphorylierung einer Vielzahl von Downstreamern (über 100 berichtet).
  Verwandte Referenzen: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Nach Aktivierung durch Wachstumsfaktoren und PI3K-Signalvermittlung vermittelt AKT die insulininduzierte Glukoseaufnahme über die Translokation von SLC2A4/GLUT4, fördert die Glykogensynthese durch Hemmung von GSK3 und stimuliert die Proteinsynthese durch Aktivierung des mTORC1-Signalwegs.
  Verwandte Referenzen: PMID:11994271, PMID:12150915, PMID:12172553
• AKT fördert das Zellüberleben, indem es pro-apoptotische Faktoren wie MAP3K5/ASK1 und BAD phosphoryliert und inaktiviert, sowie Transkriptionsfaktoren wie CREB1 aktiviert, die die Expression anti-apoptotischer Gene antreiben.
  Verwandte Referenzen: PMID:11154276, PMID:9829964, PMID:10926925
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst Zytoplasma, Zellkern, Zellmembran und den mitochondrialen Intermembranraum, was ihre breiten Signalrollen bei compartmentalisierten zellulären Antworten widerspiegelt.
• Posttranslationale Modifikationen, insbesondere Phosphorylierung, sind entscheidend für die AKT-Aktivität; zwei Schlüsselreste (Thr-308 und Ser-473 in AKT1) sind für die volle Aktivierung unerlässlich, während die Phosphorylierung am Turn-Motiv (Thr-450 in AKT1, äquivalent zu Thr-451 in AKT2 und Thr-447 in AKT3) die Kinase-Stabilität und Proteininteraktionen beeinflussen kann.
• AKT1 ist ubiquitär exprimiert, wobei veränderte Expression und Phosphorylierung mit Krankheitszuständen einschließlich Krebs in Verbindung gebracht werden; erhöhte Phospho-AKT-Spiegel werden häufig bei Brust- und Prostatakrebs beobachtet.
• Schlüsselwörter, die mit AKT1 (UniProt P31749) verbunden sind, umfassen Apoptose, Kohlenhydratstoffwechsel, Zellmembran, Zytoplasma, Kinase, Zellkern, Phosphoprotein, Proto-Onkogen, Serin/Threonin-Proteinkinase und Translationsregulation.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das den Thr-450-Bereich von humanem AKT1 abdeckt; es wird erwartet, dass der Antikörper AKT1, AKT2 und AKT3 erkennt, wenn sie an den entsprechenden äquivalenten Stellen phosphoryliert sind (T450/T451/T447).
• Für das Western Blotting bereiten Sie Lysate mit Phosphatasehemmern vor, um die Phosphorylierung zu erhalten; erwartete Banden bei ca. 48–55 kDa je nach Isoform. Fügen Sie geeignete positive Kontrollen (z. B. durch Wachstumsfaktoren stimulierte Zellen) und negative Kontrollen (unbehandelte oder phosphatasebehandelte Proben) hinzu.
• Erwägen Sie die Verwendung von phosphatasebehandelten Proben oder einer Blockierungskontrolle mit nicht-phosphoryliertem Peptid, um die Phospho-Spezifität des Signals zu bestätigen.
• Optimieren Sie in der Immunhistochemie (IHC-P) die Antigen-Retrieval-Bedingungen und fügen Sie positive/negative Gewebekontrollen hinzu, um die Färbung zu validieren; phospho-spezifische Signale können empfindlich auf Fixierung und Verarbeitung reagieren.
• Für ELISA verwenden Sie geeignete Capture/Detektions-Reagenzien und validieren den Assay mit bekannten Konzentrationen phosphorylierter Peptide oder Zelllysate.

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