Phospho-AKT1-T308+AKT2-T309+AKT3-T305 Kaninchen-pAk - P31749 / P31751 / Q9Y243

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: AKT1 (RAC-alpha Serin/Threonin-Proteinkinase) Funktion und Lokalisierung

• AKT1 (PKBα, RAC-PK-alpha) ist eine ubiquitär exprimierte Serin/Threonin-Kinase, die zusammen mit AKT2 und AKT3 die AKT-Kinase-Familie bildet, die im Zentrum der PI3K-Signalgebung steht und den Stoffwechsel, die Proliferation, das Überleben, das Wachstum und die Angiogenese steuert. Verwandte Referenzen: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Durch Phosphorylierung zahlreicher Substrate vermittelt AKT1 die insulininduzierte Glukoseaufnahme (TBC1D4) und Glykogensynthese (GSK3A/GSK3B). Verwandte Referenzen: PMID:11994271
• Es fördert das Zellüberleben durch Phosphorylierung von MAP3K5/ASK1 an Ser-83, hemmt die Apoptose und treibt die mTORC1-Signalgebung über TSC2- und DEPDC5-Phosphorylierung. Verwandte Referenzen: PMID:11154276 PMID:12150915 PMID:12172553 PMID:31548394 PMID:33594058
• AKT1 reguliert die Transkriptionsfaktoren FOXO1/3/4 und CREB1 und beeinflusst die Expression von Pro-Überlebens-Genen und die NF-κB-abhängige Transkription. Verwandte Referenzen: PMID:10358075 PMID:9829964
• Subzellulär wandert AKT1 zwischen Zytoplasma, Zellkern, Zellmembran und Mitochondrien, wo es die mitochondriale Kalziumaufnahme und andere organellespezifische Funktionen moduliert.
• Schlüsselaktivierende Phosphorylierungen erfolgen an Thr-308 (oder dem äquivalenten Thr-309 in AKT2, Thr-305 in AKT3) im Aktivierungsloop und an Ser-473 im hydrophoben Motiv, ausgelöst durch Wachstumsfaktorstimulation.
• AKT1 ist häufig bei Krebserkrankungen (Prostata, Brust) dysreguliert und wirkt als Proto-Onkogen, wobei erhöhte Phosphorylierungsniveaus mit dem Krankheitsfortschritt korrelieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Verwenden Sie während der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten; validieren Sie die Phospho-Spezifität durch Vergleich mit Gesamt-AKT-Antikörpern oder durch Phosphatase-Behandlung.
• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid um Thr-308 von humanem AKT1; der Antikörper soll phosphoryliertes AKT1, AKT2 und AKT3 an äquivalenten Stellen nachweisen, wenn er in geeigneten Spezies getestet wird.
• Für den Western Blot erwarten Sie mehrere Bänder, die den verschiedenen AKT-Isoformen entsprechen (~48-55 kDa); bestätigen Sie die Bandenidentität mit isoformspezifischen Kontrollen oder siRNA, falls erforderlich.
• Für ELISA sollten Sie ein Setup aus gepaarten phospho-spezifischen und Gesamt-AKT-Antikörpern in Betracht ziehen, um die Proteinbeladung zu normalisieren.
• Optimieren Sie die Verdünnung des Primärantikörpers für Ihren spezifischen Probentyp; vorgeschlagene Startverdünnungen für WB liegen typischerweise bei 1:500-1:2000, müssen aber empirisch bestimmt werden.

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