Phospho-Akt (S473) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: AKT (AKT1/AKT2/AKT3) Funktion und Lokalisierung

• AKT1 ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase und eine von drei AKT-Isoformen (AKT1, AKT2, AKT3), die Signalübertragung stromabwärts von PI3K vermitteln und Stoffwechsel, Proliferation, Zellüberleben, Wachstum und Angiogenese regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Es phosphoryliert GSK3, um die Glykogensynthese und Zellproliferation zu regulieren, und fördert die Glukoseaufnahme durch Vermittlung der insulininduzierten Translokation des GLUT4-Glukosetransporters.
• AKT1 fördert das Zellüberleben durch Phosphorylierung pro-apoptotischer Faktoren, einschließlich MAP3K5 (Apoptose-Signal-assoziierte Kinase), und hemmt so oxidativ stressinduzierte Apoptose. Verwandte Referenzen: PMID:11154276
• Durch Phosphorylierung von TSC2 an Ser-939 und Thr-1462 aktiviert AKT den mTORC1-Signalweg und verbessert die Proteinsynthese und das Zellwachstum. Verwandte Referenzen: PMID:12150915 PMID:12172553
• AKT reguliert FOXO-Transkriptionsfaktoren durch Phosphorylierung von FOXO1, FOXO3 und FOXO4, was zu deren zytoplasmatischer Retention und Hemmung der Expression pro-apoptotischer Gene führt. Verwandte Referenzen: PMID:10358075
• Es moduliert die NF-kappa-B-abhängige Transkription und phosphoryliert CREB1, was die Expression von Überlebensgenen wie BCL2 und MCL1 induziert. Verwandte Referenzen: PMID:9829964
• AKT1 ist im Zytoplasma, Zellkern, der Zellmembran und im mitochondrialen Intermembranraum lokalisiert, was seine vielfältigen funktionellen Rollen widerspiegelt.
• Das Protein wird in menschlichen Zelltypen weit verbreitet exprimiert, wobei während des Fortschreitens von Prostata- und Brustkrebs eine erhöhte Expression und Phosphorylierung beobachtet wird.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein phosphoryliertes Peptid hergestellt, das Ser473 von humanem AKT1 entspricht; er kann die äquivalente Phosphorylierungsstelle auf AKT2 und AKT3 aufgrund von Sequenzkonservierung erkennen.
• Für Western Blot: Phosphatase-Inhibitoren in Lysepuffer einschließen und die Verwendung einer Phosphatase-behandelten Kontrolle zur Bestätigung der Phospho-Spezifität in Betracht ziehen.
• Vorhergesagte Molekulargewichte: 48–55 kDa für verschiedene AKT-Isoformen; Blockierung mit dem immunisierenden Phosphopeptid kann helfen, die Bandenidentität zu verifizieren.
• Für ELISA: Konzentration des Beschichtungsantigens optimieren und gepaarte phospho-spezifische und Gesamtantikörper zur Normalisierung in Betracht ziehen.
• Leistung im relevanten Proben- und Behandlungsbedingungssystem (z. B. Wachstumsfaktorstimulation oder Inhibitorbehandlungen) vor großflächigem Einsatz validieren.

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