PERK Kaninchen-poliklonaler Antikörper für IF/ICC, ELISA – Q9NZJ5

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PERK

• Proteinidentität und Isoformen: PERK (EIF2AK3) ist auch bekannt als PRKR-ähnliche Endoplasmatisches Retikulum-Kinase, pankreatische eIF2-alpha-Kinase und Protein-Tyrosinkinase EIF2AK3. Es gehört zur Familie der eIF2α-Kinasen und ist der primäre Sensor für ER-Stress.
• Kinase der Entfalteten-Protein-Antwort (UPR): PERK ist eine metabolische Stress-sensierende Kinase, die die α-Untereinheit des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktors 2 (EIF2S1/eIF-2α) als Reaktion auf ungefaltete Proteine und verschiedene zelluläre Stressarten phosphoryliert.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:10026192, PMID:10677345, PMID:11907036
• Aktivierung durch fehlgefaltete Proteine: Es erkennt und bindet spezifisch fehlgefaltete Proteine im ER, was Autophosphorylierung und Aktivierung auslöst und die integrierte Stressantwort (ISR) initiiert.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:10677345, PMID:27917829, PMID:31023583
• Neuprogrammierung der Translation: Die eIF2α-Phosphorylierung schwächt die globale cap-abhängige Proteinsynthese ab, während sie selektiv die Translation von stressresponsiven mRNAs, einschließlich der Transkriptionsfaktoren ATF4 und QRICH1, fördert und dadurch die Genexpression neu programmiert.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:10026192, PMID:10677345, PMID:31023583
• Mitochondriale Regulation: PERK-vermittelte UPR-Signalgebung erhöht die mitochondriale oxidative Phosphorylierung durch Hochregulation der COX7A2L-Expression über ATF4. An den Kontaktstellen zwischen Mitochondrien und ER hemmt ATAD3A PERK, um Mitochondrien vor übermäßiger UPR zu schützen.
  Verwandte Referenzen:
  PMID:31023583, PMID:39116259
• NRF2-Aktivierung: Zusätzlich zu eIF2α phosphoryliert PERK NFE2L2/NRF2, was dessen Dissoziation von KEAP1 und anschließende nukleäre Translokation verursacht, die antioxidative und Entgiftungsgene aktiviert (nach Ähnlichkeit).
• Subzelluläre Lokalisation: Membran des Endoplasmatischen Retikulums – PERK ist ein Transmembranprotein, das überwiegend im ER lokalisiert ist.
• Gewebeverteilung: Ubiquitär exprimiert, mit besonders hohen Spiegeln in sezernierenden Geweben, was mit seiner Rolle bei der Überwachung der Faltungsumgebung im ER übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einer Region innerhalb der Aminosäuren 50–600 des menschlichen PERK. Für IF/ICC werden Standardbedingungen für Permeabilisierung und Fixierung empfohlen, die für im ER lokalisierte Proteine geeignet sind. Führen Sie eine Titration des primären Antikörpers durch, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren.
• Bei der Verwendung für ELISA erwägen Sie die Einbeziehung eines blockierenden Peptids oder rekombinanten PERK-Proteins als Spezifitätskontrolle. Validieren Sie die Kreuzreaktivität mit Mausproben anhand von Lysaten aus Geweben mit hoher Sekretionsaktivität.
• Da PERK eine ER-Transmembrankinase ist, erwägen Sie die Verwendung milder Detergenzien bei der Proteinextraktion, um konformationelle Epitope zu erhalten, wenn der Antikörper in anderen Immunoassays über die validierten Anwendungen hinaus eingesetzt wird.

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