PerCP-Kaninchen-anti-human/monkey-CD8a-mAb – P01732

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD8a

• CD8a (T-Zell-Oberflächenglykoprotein, CD8-Alpha-Kette) ist ein vom CD8A-Gen (Gen-ID: 925) kodiertes Transmembran-Glykoprotein. Es ist auch als T8/Leu-2 und p32 bekannt.
• Dient als Korezeptor für MHC-Klasse-I-Moleküle auf antigenpräsentierenden Zellen und interagiert gleichzeitig mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR), um die Src-Kinase LCK zu rekrutieren. Dadurch werden intrazelluläre Signalwege eingeleitet, die zur Aktivierung zytotoxischer T-Lymphozyten, Zytokinproduktion, Motilität und Adhäsion führen.
• Spielt eine entscheidende Rolle in der adaptiven Immunität, indem es zytotoxischen T-Lymphozyten ermöglicht, infizierte Zellen und Tumorzellen zu erkennen und zu eliminieren.
• In natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) bieten CD8A-Homodimere einen Überlebensmechanismus, der die Konjugation mit mehreren Zielzellen und deren Lyse ermöglicht und das Überleben sowie die Differenzierung aktivierter Lymphozyten zu CD8-Gedächtnis-T-Zellen fördert.
• CD8 liegt auf Thymus-abgeleiteten T-Zellen typischerweise als Disulfid-verknüpftes Heterodimer aus Alpha- (CD8A) und Beta-Ketten (CD8B) vor, kann jedoch auch als CD8A-Homodimer auf Untergruppen von NK-Zellen, Gedächtnis-T-Zellen, intraepithelialen Lymphozyten, Monozyten und dendritischen Zellen exprimiert werden.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst die Zellmembran und sezernierte Formen. CD8a ist ein Lipoprotein mit einer Transmembranhelix und durchläuft posttranslationale Modifikationen wie Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung und Palmitoylierung.
• Gehört zur Immunglobulin-Superfamilie und enthält eine Immunglobulindomäne. Alternatives Spleißen führt zur Bildung mehrerer Isoformen.
• Wird nach Stimulation mit dem Herpes-simplex-Virus-1 auf plasmazytoiden dendritischen Zellen exprimiert, was auf eine Rolle bei antiviralen Reaktionen hinweist.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen (Aminosäuren 22–182) umfasst die extrazelluläre Domäne von CD8A, von der erwartet wird, dass sie Antikörper hervorruft, die das native Zelloberflächenprotein erkennen. Für die Durchflusszytometrie sollte der Antikörper titriert werden, um die optimale Konzentration für den jeweiligen Zelltyp und das jeweilige Färbeprotokoll zu bestimmen.
• Da dieser Antikörper an PerCP konjugiert ist, muss sichergestellt werden, dass das Durchflusszytometer mit geeigneten Laser- und Filtersätzen ausgestattet ist (typischerweise Anregung bei 488 nm, Emission bei 675 nm). PerCP ist anfällig für Photobleaching. Gefärbte Proben daher im Dunkeln handhaben und eine längere Lichtexposition vermeiden.
• Die Kreuzreaktivität wurde für Menschen und Javaneraffen validiert. Bei Verwendung anderer Spezies sollte die Sequenzhomologie der Immunogenregion überprüft werden, um eine mögliche Kreuzreaktivität vorherzusagen und experimentell zu validieren.
• Für die intrazelluläre Färbung kann ein Permeabilisierungsschritt erforderlich sein. Geeignete Isotypkontrollen sollten eingeschlossen werden, um eine spezifische Färbung zu unterscheiden.

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