PER2 Kaninchen-monoklonaler Antikörper (Mensch) für WB, ELISA, ChIP - O15055

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PER2

• PER2 (Period circadian protein homolog 2), auch bekannt als zirkadianes Uhrenprotein PERIOD 2, ist ein Kernbestandteil der molekularen zirkadianen Uhr. Es fungiert als transkriptioneller Repressor innerhalb der Transkriptions-/Translations-Rückkopplungsschleife (TTFL), die ungefähr 24-Stunden-Rhythmen der Genexpression antreibt.
• Gemeinsam mit PER1, CRY1 und CRY2 bildet PER2 den negativen Zweig der TTFL. Es interagiert direkt mit CLOCK-BMAL1-Heterodimeren an E-Box-Promotoren, um deren eigene Expression zu hemmen, während posttranslationale Modifikationen (z. B. Phosphorylierung, Acetylierung, Ubiquitinierung) die Periode (tau) der zirkadianen Rhythmen feinabstimmen.
• PER2 trägt zur uhrenkontrollierten Repression auf mehreren Wegen bei: Es rekrutiert SIN3-HDAC-Chromatinremodellierungskomplexe und H3K9-Methyltransferasen (SUV39H1/2) an Uhrengenpromotoren und interagiert außerdem mit RNA-bindenden Proteinen und Helikasen an 3'-Terminationsstellen, um die Transkriptionstermination zu modulieren.
• Das Protein ist an der Stoffwechsel- und Herz-Kreislauf-Regulation beteiligt. Es agiert als Koaktivator von PPARA und Korepressor von NR1D1, bindet rhythmisch an Promotoren von Genen wie BMAL1 und G6PC1 und hemmt die PPARG-vermittelte Adipogenese. PER2 reguliert außerdem die Produktion von Stickstoffmonoxid und Prostaglandinen in Aorten und steuert die Glutamataufnahme über die VGLUT1-Expression.
• Biallelische Verlustfunktionsmutationen in PER2 verursachen das familiäre fortgeschrittene Schlafphasensyndrom (FASPS), was seine essentielle Rolle bei der Synchronisation der zirkadianen Uhr an Umgebungslicht-Dunkel-Zyklen unterstreicht.
• PER2 lokalisiert hauptsächlich im Zellkern, kommt aber auch im Zytoplasma, der perinukleären Region und dem Nukleolus vor – dies spiegelt das dynamische Shuttling und kompartimentspezifische Funktionen wider.
• Das Protein ist weit verbreitet exprimiert, mit hohen Gehalten im Skelettmuskel und der Bauchspeicheldrüse und geringeren Gehalten in der Lunge. Isoform 2 wird spezifisch in Keratinozyten nachgewiesen.
• Wichtige strukturelle Merkmale sind zwei PAS-Domänen und eine C-terminale zytoplasmatische Lokalisationsdomäne, die zu Protein-Protein-Interaktionen und subzellulärem Transport beitragen.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 1–100 von humanem PER2 (O15055), eine N-terminale Region, die gut konserviert ist und wahrscheinlich Antikörper erzeugt, die sowohl die volllänge als auch verkürzte Isoformen erkennen.
• Für das Western Blotting (WB) erwarten Sie eine Bande bei ungefähr 137 kDa; verwenden Sie Kern- oder Ganzzelllysate aus humanen Geweben oder Zelllinien, von denen bekannt ist, dass sie PER2 exprimieren (z. B. Skelettmuskel, Bauchspeicheldrüse). Endogene PER2-Spiegel oszillieren über den zirkadianen Zyklus – erwägen Sie die Probenahme zu definierten Zeitgeberzeiten.
• Für ELISA-Anwendungen kann die Kopplung des Antikörpers mit einem Nachweisreagenz, das auf eine nicht überlappende Epitop abzielt, Sensitivität und Spezifität verbessern; validieren Sie den dynamischen Bereich mit rekombinantem PER2-Protein oder kontrollierten Zelllysaten.
• Bei der Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) kann der Antikörper E-Box-haltige Promotorregionen uhrenkontrollierter Gene (z. B. PER1, CRY1) anreichern. Fügen Sie geeignete Negativkontrollregionen hinzu und bestätigen Sie die Anreicherung per qPCR unter synchronisierten Uhrenbedingungen.
• Aufgrund der Rolle posttranslationaler Modifikationen für die PER2-Funktion sollten Sie bei der Untersuchung phosphorylierungsabhängiger Interaktionen oder Lokalisierung Phosphataseinhibitoren oder denaturierende Bedingungen in Betracht ziehen.

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