PE/Cyanine7 Kaninchen anti-Human/Affe CD8a monoklonaler Antikörper für Durchflusszytometrie - P01732

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD8a-Funktion und -Lokalisierung

• CD8A kodiert die Alpha-Kette des T-Zell-Oberflächenglykoproteins CD8, einen kritischen Korezeptor der adaptiven Immunität. Es existiert entweder als eine durch Disulfidbrücken verknüpfte Alpha/Beta-Heterodimer oder als ein Alpha/Alpha-Homodimer.
• Die CD8-Alpha-Kette fungiert als Korezeptor für MHC-Klasse-I-Moleküle, indem sie gleichzeitig mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR) und dem MHC I auf antigenpräsentierenden Zellen interagiert. Dies rekrutiert die Src-Kinase LCK, löst nachgelagerte Signalwege aus, die zur Aktivierung von zytotoxischen T-Lymphozyten, zur Zytokinproduktion und zum Abtöten von Zielzellen führen.
• In natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) bieten CD8A-Homodimere einen Überlebensmechanismus und erleichtern die Konjugation mit und Lyse mehrerer Zielzellen. Sie fördern auch das Überleben und die Differenzierung aktivierter Lymphozyten zu Gedächtnis-CD8-T-Zellen.
• Die subzelluläre Lokalisierung erfolgt hauptsächlich an der Zellmembran als Single-Pass-Typ-I-Membranprotein. Eine lösliche, sezernierte Form wird auch durch alternatives Spleißen produziert.
• Gewebsspezifität: In thymusabhängigen T-Zellen besteht CD8 typischerweise aus einem Alpha/Beta-Heterodimer. CD8A-Homodimere werden auf Subsets von NK-Zellen, Gedächtnis-T-Zellen, intraepithelialen Lymphozyten, Monozyten und dendritischen Zellen gefunden. Die Expression wird auf plasmazytoiden dendritischen Zellen nach viraler Stimulation hochreguliert.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, die für das höhere als vorhergesagte Molekulargewicht verantwortlich ist (unmodifiziert ~26 kDa; reife Formen bei 21, 25 und 30 kDa), und Palmitoylierung, die das Protein an Lipid-Rafts verankert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das zur Erzeugung dieses Antikörpers verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das den Aminosäuren 22-182 entspricht, was die extrazelluläre Domäne von CD8A umfasst. Diese Region ist entscheidend für die MHC-I-Interaktion und ist auf der Zelloberfläche exponiert, was sie zu einem idealen Ziel für Anwendungen der Durchflusszytometrie macht.
• Für die Durchflusszytometrie (FC) titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Konzentration für Ihre spezifische Probe zu bestimmen. Fügen Sie geeignete Isotyp-Kontrollantikörper hinzu, die mit dem gleichen Fluorophor (PE/Cyanine7) konjugiert sind, um die unspezifische Bindung zu bewerten.
• Da PE/Cyanine7 ein Tandem-Farbstoff ist, vermeiden Sie längere Lichtexposition und Fixierungsmittel, die den Farbstoff abbauen können. Erwägen Sie die Verwendung einer Kompensationskontrolle bei der Durchführung von Multicolor-Panels, um die spektrale Überlappung zu korrigieren.
• Validieren Sie die Antikörperleistung unter Verwendung bekannter positiver und negativer Zellpopulationen: zum Beispiel menschliche periphere Blut-T-Zellen (CD8+ positiv) gegenüber B-Zellen (negativ) oder geeignete Zelllinien.
• Wenn Sie intrazelluläres CD8A nachweisen (z. B. in aktivierten oder gewebespezifischen T-Zellen), optimieren Sie die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen, die das Epitop und den Fluorophor erhalten.

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