PE/Cyanine7-Kaninchen-Anti-Human-TNF-α-Monoklonaler Antikörper für FC (intra) - P01375

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: TNF-Funktion und Lokalisierung

• TNF-α (Cachectin, TNF-alpha, TNFSF2) ist ein pleiotroper, proinflammatorischer Zytokin aus der Tumornekrosefaktor-Liganden-Superfamilie, das sowohl als Typ-II-Transmembranprotein als auch als lösliches Homotrimer nach proteolytischer Spaltung existiert.
• Es wird hauptsächlich von aktivierten Makrophagen sezerniert und bindet an seine Rezeptoren TNFRSF1A/TNFR1 und TNFRSF1B/TNFBR, wodurch Signalwege ausgelöst werden, die je nach zellulärem Kontext zu Zelltod, Überleben, Differenzierung oder Proliferation führen können.
• TNF-α wirkt als endogenes Pyrogen, induziert Fieber direkt oder über IL-1-Stimulation und ist ein Schlüsselmediator der Kachexie bei chronischen Entzündungen und Krebs.
• In regulatorischen T-Zellen (Tregs) beeinträchtigt TNF-α die suppressive Funktion durch Hochregulierung der Proteinphosphatase 1 (PP1), die FOXP3 an Ser-418 dephosphoryliert, wodurch FOXP3 inaktiviert und die Treg-Aktivität bei rheumatoider Arthritis beeinträchtigt wird. Verwandte Referenzen: PMID:23396208
• TNF-α kann Antikrebsaktivität vermitteln: In Blasenkrebszellen töten BCG-stimulierte Neutrophile Tumorzellen über einen TNF-α-abhängigen Mechanismus, der mit SMAC-Mimetika synergiert. Verwandte Referenzen: PMID:16829952 PMID:22517918 PMID:23396208
• Es fördert die Angiogenese durch synergistische Induktion der VEGF-Produktion mit IL-1β und IL-6 und stimuliert die Osteoklastogenese, wodurch es zur Knochenresorption beiträgt. Verwandte Referenzen: PMID:12794819
• Die intrazelluläre Domäne (ICD) von TNF-α kann durch regulierte intramembranöse Proteolyse erzeugt werden und hat sich als Induktor der IL-12-Produktion in dendritischen Zellen erwiesen.
• TNF-α ist an der Zellmembran lokalisiert und wird auch sezerniert; posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, Phosphorylierung, Myristoylierung und Disulfidbindungsbildung, die seine Stabilität und Funktion modulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (aa 77-233) entspricht der löslichen extrazellulären Domäne von humanem TNF-α; von diesem Antikörper wird erwartet, dass er sowohl den transmembranen Vorläufer als auch das sezernierte reife Zytokin erkennt.
• Für die intrazelluläre Durchflusszytometrie (FC intra) die Zellfixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen optimieren. Unstimulierte Zellen oder irrelevante Stimulationen als negative Kontrollen verwenden.
• Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Färbekonzentration für Ihr spezifisches experimentelles System und Ihren Zelltyp zu bestimmen.
• Da die Kreuzreaktivität auf human beschränkt ist, validieren Sie die Spezifität in humanen Proben und ziehen Sie die Verwendung artspezifischer biologischer Kontrollen in Betracht.

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